脹果甘草愈傷組織多糖的合成調(diào)控和生物活性分析.pdf

1、豆科植物甘草（Glycyrrhiza spp.）是我國重要的傳統(tǒng)藥材之一，多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶，含有三萜皂苷類、黃酮類及多糖類等化合物。甘草多糖（Glycyrrhiza polysaccharide）作為甘草中的一種重要的生物活性成分，可以控制和調(diào)控機體細(xì)胞的分裂分化和生長衰老，具有多種免疫增強功能以及較強的抗腫瘤抗病毒作用。甘草的現(xiàn)代化學(xué)及生物活性的研究重點大多集中于甘草酸和黃酮類化合物，對甘草多糖的

2、研究報道較少。本文以甘草資源三大品種之一的脹果甘草（Glycyrrhiza inflata Bat.）為研究對象，在MS基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，通過調(diào)整培養(yǎng)基成分對脹果甘草愈傷組織細(xì)胞的生長及多糖合成進(jìn)行調(diào)控，達(dá)到了增加其產(chǎn)物甘草多糖的含量的目的，并利用正交試驗法找出了超聲波提取愈傷組織中甘草多糖的最優(yōu)條件。所得到甘草多糖經(jīng)過除蛋白、半透膜透析、層析柱洗脫等純化流程去除了絕大部分的雜質(zhì)，最后對達(dá)到一定純度后的甘草多糖與相同條件提取純化的天然

3、甘草藥材中甘草多糖的抗氧化活性以及抗腫瘤活性進(jìn)行了比較分析。
　　主要試驗結(jié)果如下：
　　1.當(dāng)采用液料比70:1，超聲時間30min，超聲溫度90℃，超聲功率80W時甘草子葉愈傷組織材料的多糖提取率達(dá)最大值7.72％，甘草多糖含量為86.80％；當(dāng)提取條件為液料比40:1，超聲時間20min，超聲溫度80℃，超聲功率80W時，甘草下胚軸愈傷組織材料的多糖提取率達(dá)最大值7.49％，甘草多糖含量為76.71％。而相同條件下甘草

4、藥材的多糖提取率僅僅為5.26％，甘草多糖含量僅為58.37％，明顯低于從甘草愈傷組織中提取的多糖含量。
　　2．MS基本培養(yǎng)基附加蔗糖最利于甘草愈傷組織生長，6,7-V基本培養(yǎng)基雖利于甘草多糖的合成但不利于愈傷組織生長從而影響多糖產(chǎn)量；綜合愈傷組織的生長和多糖合成兩方面考慮培養(yǎng)基中PO43-濃度確定為1.25 mmol/L、Ca2+濃度選擇2.99 mmol/L時，有利于甘草愈傷組織生長及多糖的生物合成
　　3．經(jīng)過 Se

5、vag法、流水透析、二乙基氨基纖維素（DEAE-52）、葡聚糖凝膠（Sephadex G-75）柱層析等技術(shù)對甘草多糖進(jìn)一步純化后，愈傷組織中的甘草多糖的純度可達(dá)92.69％，明顯高于天然甘草藥材中的多糖純度86.42％。
　　4．試驗材料甘草愈傷組織與天然甘草藥材中的甘草多糖均具有一定的抗氧化活性和抗腫瘤活性，且愈傷組織中的甘草多糖對于清除自由基和對腫瘤細(xì)胞的抑制作用略比天然甘草藥材明顯。
　　目前甘草多糖的獲得大多取材于