AG1478通過(guò)FOXO3a下調(diào)FOXM1表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、研究目的：
　　肺癌是世界上惡性腫瘤死亡率最高的疾病，分子靶向治療是近年來(lái)肺癌治療的新突破。轉(zhuǎn)錄因子 FOXM1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)，并作為抑癌性分子FOXO3a及多種抗腫瘤藥物的靶點(diǎn)。但目前關(guān)于FOXM1對(duì)表皮生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶抑制劑在肺癌靶向治療中的影響及分子機(jī)制尚不清楚。
　　研究方法：
　　1. AG1478處理人肺癌細(xì)胞，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖狀態(tài)；RT-PCR、Western blot及熒光素酶報(bào)

2、告系統(tǒng)法分別檢測(cè)FOXM1 mRNA、蛋白表達(dá)及其啟動(dòng)子活性的改變。
　　2. FOXM1 siRNA轉(zhuǎn)染人肺癌細(xì)胞，Western blot法檢測(cè)FOXM1蛋白表達(dá)變化；流式細(xì)胞計(jì)數(shù)、克隆形成試驗(yàn)及CCK-8法分別檢測(cè)細(xì)胞周期分布、克隆形成能力及AG1478藥物敏感性的改變。
　　3. AG1478處理人肺癌細(xì)胞，Western blot及細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)FOXO3a分子的亞細(xì)胞分布。FOXO3a siRNA及pEGFP

3、-N1-FOXO3a重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，Western blot法檢測(cè)FOXM1表達(dá)的改變；ChIP法分析FOXO3a與FOXM1基因啟動(dòng)子的結(jié)合。
　　研究結(jié)果：
　　1. AG1478抑制肺癌細(xì)胞的增殖，下調(diào)FOXM1表達(dá)及其啟動(dòng)子活性，并促進(jìn)活化FOXO3a的表達(dá)。
　　2.沉默F(xiàn)OXM1后，F(xiàn)OXM1 mRNA及蛋白表達(dá)明顯下降，其下游CyclinB1、c-Myc、Bcl-2隨之下降，而p21、Cleaved-P

4、ARP則被上調(diào)；細(xì)胞克隆形成能力明顯降低，細(xì)胞周期阻滯在G2/M期；并明顯增加細(xì)胞對(duì)AG1478的藥物敏感性。
　　3. AG1478誘導(dǎo)FOXO3a的胞核重定位。沉默F(xiàn)OXO3a后，F(xiàn)OXM1 mRNA的表達(dá)明顯增加，且AG1478介導(dǎo)的FOXM1表達(dá)抑制被部分削弱；過(guò)表達(dá)FOXO3a后，F(xiàn)OXM1的蛋白水平明顯下降。FOXO3a與FOXM1基因啟動(dòng)子-1561~-1553序列結(jié)合。
　　研究結(jié)論：
　　在人肺癌細(xì)胞