過表達(dá)hepaCAM下調(diào)AKT-FOXO信號(hào)通路抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖.pdf

1、本文對(duì)過表達(dá)hepaCAM下調(diào)AKT/FOXO信號(hào)通路抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：hepaCAM和FOXO3在膀胱癌中的表達(dá)及相關(guān)性。
　　目的：收集臨床標(biāo)本研究肝細(xì)胞粘附分子(hepaCAM)和叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O亞族3(FOXO3)在膀胱癌(BCa)中的表達(dá)及相關(guān)性。
　　方法：收集22例膀胱癌患者癌組織標(biāo)本和14例癌旁正常組織標(biāo)本，免疫組織化學(xué)染色法(IHC)檢測(cè)hepaCAM

2、和FOXO3的表達(dá)量。正置顯微鏡下成像，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析hepaCAM和FOXO3蛋白在膀胱癌中的表達(dá)量與各種臨床參數(shù)之間的關(guān)系以及二者表達(dá)量相關(guān)性。
　　結(jié)果：hepaCAM和FOXO3在膀胱癌中均顯示出表達(dá)缺失的現(xiàn)象，在癌旁正常組織中高表達(dá)。統(tǒng)計(jì)分析得出，hepaCAM和FOXO3在膀胱癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性（r=0.898, p<0.01），而其二者與相關(guān)臨床參數(shù)無關(guān)(p>.05)。
　　結(jié)論：FOXO3蛋白在膀胱癌組織中

3、表達(dá)減低，且與hepaCAM的表達(dá)正相關(guān)，這一結(jié)果為hepaCAM對(duì)FOXO3在膀胱癌中的調(diào)節(jié)關(guān)系的探究奠定了臨床實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　第二部分：hepaCAM下調(diào)AKT/FOXO抑制膀胱癌細(xì)胞增殖機(jī)制。
　　目的：研究過表達(dá)hepaCAM基因在膀胱癌細(xì)胞中對(duì)AKT/FOXO信號(hào)分子以及增殖相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié)作用，并且用AKT信號(hào)的小分子抑制劑 LY294002與 hepaCAM過表達(dá)腺病毒聯(lián)合使用，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)hepaCAM通過AKT

4、/FOXO阻止膀胱癌T24、BIU-87細(xì)胞株增殖及生長(zhǎng)活性的分子信號(hào)機(jī)制。
　　方法：利用Western blot驗(yàn)證過表達(dá)hepaCAM時(shí)p-AKT, p-FOXO1和p-FOXO3及增殖相關(guān)蛋白CDK2和PCNA表達(dá)改變；細(xì)胞免疫熒光（IF）檢測(cè)FOXO3在膀胱癌T24, BIU-87細(xì)胞株核漿的定位情況，同時(shí)用 western blot進(jìn)行定量驗(yàn)證。噻唑藍(lán)(MTT)法鑒定 LY294002對(duì)BIU-87、T24細(xì)胞生長(zhǎng)活力

5、的影響，并且檢測(cè)hepaCAM與LY294002聯(lián)合運(yùn)用時(shí)膀胱癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況；克隆形成檢測(cè) hepaCAM與LY294002聯(lián)用對(duì)膀胱癌細(xì)胞 BIU-87、T24增殖的影響；Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)hepaCAM和LY294002聯(lián)用p-AKT、p-FOXO1、p-FOXO3、CDK2和PCNA的表達(dá)改變，統(tǒng)計(jì)定量分析結(jié)果。
　　結(jié)果：在膀胱癌T24、BIU-87細(xì)胞中，過表達(dá)hepaCAM明顯減弱p-AKT, p-

6、FOXO1, p-FOXO3以及小分子蛋白CDK2和PCNA的表達(dá)（P<0.05）；細(xì)胞免疫熒光及 western blot結(jié)果證明，hepaCAM促進(jìn)FOXO3的核轉(zhuǎn)位，使FOXO3在細(xì)胞核中的表達(dá)量升高而在細(xì)胞漿中減弱。隨著LY294002濃度的增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，膀胱癌BIU-87、T24細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯被抑制，而 hepaCAM與 LY294002聯(lián)用較hepaCAM或LY294002單獨(dú)使用更加顯著地抑制了細(xì)胞的增長(zhǎng)；克隆形成