尿多酸肽對人胃癌耐藥細(xì)胞SGC-7901-ADM的逆轉(zhuǎn)耐藥作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的: 通過檢測不同劑量尿多酸肽(CDA-Ⅱ)對人胃癌耐藥細(xì)胞株SGC-7901/ADM的逆轉(zhuǎn)耐藥作用，探討其可能的蛋白組學(xué)作用機(jī)制。 方法: 建立耐藥細(xì)胞株SGC-7901/ADM，測定其與親代細(xì)胞的耐藥倍數(shù)。將耐藥細(xì)胞株SGC-7901/ADM接種于96孔板，以不同的藥物接觸方案與細(xì)胞共培養(yǎng)：實(shí)驗(yàn)組和對照組均在培養(yǎng)液中加入2μg/ml濃度的ADM，實(shí)驗(yàn)組包括CDA-Ⅱ低劑量組(2mg/ml)、中劑量組(4mg/ml)、高劑量

2、組(8mg/ml)，陽性對照維拉帕米組(2μg/ml)，空白對照組單純以含有2μg/ml ADM的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞。給藥期間每天觀察細(xì)胞生長情況，隔日一次消化細(xì)胞計(jì)數(shù)，以觀察細(xì)胞生長的抑制情況。采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞存活情況，以觀察藥物對耐藥細(xì)胞的抑制作用，并計(jì)算出逆轉(zhuǎn)耐藥的倍數(shù)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測耐藥細(xì)胞在藥物作用以后的P-gp表達(dá)情況，以了解其逆轉(zhuǎn)耐藥的蛋白組學(xué)作用機(jī)制。 結(jié)果: ①培養(yǎng)耐藥細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，培養(yǎng)

3、出的耐藥細(xì)胞株SGC-7901/ADM較親代細(xì)胞株SGC-7901對阿霉素的耐藥倍數(shù)為2.88。②細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，低劑量CDA-Ⅱ組及維拉帕米組均顯示出抑制耐藥株腫瘤細(xì)胞生長的作用，與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但兩組內(nèi)差異無顯著性意義(P>0.05)，中高劑量組與空白對照組及低劑量CDA-Ⅱ、維拉帕米組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。培養(yǎng)10天維拉帕米組、低劑量及中高劑量CDA-Ⅱ組的耐藥株瘤細(xì)胞抑制率

4、分別為23.88％、23.93％、56.22％及56.8％，。⑨CDA-Ⅱ逆轉(zhuǎn)耐藥MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，用藥后高中低各劑量CDA-Ⅱ組及維拉帕米組對耐藥細(xì)胞株的耐藥倍數(shù)分別為8.84，5.01，1.67及1.56，提示CDA-Ⅱ?qū)GC-7901/ADM的抑制作用是通過逆轉(zhuǎn)耐藥作用實(shí)現(xiàn)的。④免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，各劑量組CDA-Ⅱ作用后，耐藥細(xì)胞株膜表面P-gp表達(dá)明顯減少，與對照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論