苦參堿逆轉(zhuǎn)人胃癌細胞株SGC7901-VCR耐藥性的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 通過研究中藥苦參堿(Matrine)對人胃癌耐藥細胞株SGC7901/VCR多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)效應及其機制,來尋找適合人胃癌多藥耐藥臨床治療的新型多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑。
　　 方法:
　　 1、將SGC7901/VCR細胞進行實驗室條件下的體外培養(yǎng)傳代,獲得實驗所需要細胞數(shù)量。
　　 2、以長春新堿(VCR)誘導的人胃癌多藥耐藥細胞SGC7901/VCR為研究對象,利用MTT比色法研究苦參堿和/或長春

2、新堿對體外培養(yǎng)的人胃癌多藥耐藥細胞SGC7901/VCR細胞增殖的影響及苦參堿的逆轉(zhuǎn)作用。
　　 3、用Annexin V/PI法經(jīng)流式細胞儀技術檢測細胞凋亡。
　　 4、用間接免疫熒光法經(jīng)流式細胞儀技術檢測多藥耐藥相關蛋白(MRP)在細胞表達的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、體外培養(yǎng)條件的人胃癌多藥耐藥細胞株SGC7901/VCR在長春新堿濃度為1ug/ml的細胞培養(yǎng)液中能夠正常增殖。在無藥培養(yǎng)1月后,

3、再行1ug/ml的長春新堿的培養(yǎng)液培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)SGC7901/VCR細胞2.3天后出現(xiàn)全部死亡。
　　 2、MTT比色法法顯示苦參堿在0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml濃度條件下分別處理SGC7901/VCR細胞72h后,其生長抑制率依次為10％、15％、32％,且可以逆轉(zhuǎn)SGC7901/VCR對VCR的耐藥,呈劑量依賴性,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為9.4倍、13.4倍、24.5倍。
　　 3、通過流式細胞儀檢測細胞凋亡顯示SG

4、C7901/VCR正常凋亡率約為2.57％.在加入0.5ug/ml的VCR后,其凋亡率約為2.96％,與正常凋亡率相比無顯著性差異(P>0.05)。苦參堿在0.5mg/ml、1mg/ml終濃度條件下分別處理SGC7901/VCR細胞24h后的凋亡率依次約為3.9％、7.53％,兩組與正常凋亡率及加入0.5ug/ml的VCR相比具有顯著性差異(P<0.01).而在長春新堿中加入苦參堿在0.5mg/ml、1mg/ml濃度條件下的凋亡率則增加

5、至約為17.33％、30.33％。在0.5ug/ml的VCR中加入0.5mg/ml、1mg/ml苦參堿后,不僅與單純苦參堿0.5mg/ml、1mg/ml濃度條件下相比,具有顯著性差異(P<0.01),且兩者之間相比具有顯著性差異(P<0.01).
　　 4、用間接免疫熒光法經(jīng)流式細胞儀技術檢測SGC7901/VCR的MRP顯示,正常SGC7901/VCR的MRP表達率為36±4.32％.而在使用非細胞毒性劑量0.5mg/ml苦參

6、堿與SGC7901/VCR細胞共同培養(yǎng)24h后,SGC7901/VCR細胞的MRP表達從36％降低為25±3.85％,表達率顯著下降(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1、引進的人胃癌SGC7901/VCR細胞株具有耐長春新堿的作用,其耐藥特性需要在含長春新堿培養(yǎng)液中維持。
　　 2、苦參堿具有對SGC7901/VCR細胞株的殺傷作用,且可逆轉(zhuǎn)其多藥耐藥性。
　　 3、苦參堿具有可誘導SGC7901/