蟾蜍靈對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926增殖和誘導(dǎo)凋亡的研究.pdf

1、本論文以人血管內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926為靶細(xì)胞，通過(guò)一系列的研究，觀察蟾蜍靈作為鈉泵抑制劑對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與死亡的形態(tài)學(xué)特征；測(cè)定了蟾蜍靈對(duì)EAhy926細(xì)胞周期的影響以及細(xì)胞內(nèi)游離的Ca2+、Na+、K+濃度的變化；通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了蟾蜍靈作用細(xì)胞前后對(duì)鈉泵α1亞單位、β1亞單位、Caspase3和Bcl-2 mRNA表達(dá)的影響，為探討蟾蜍靈在血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與死亡過(guò)程中的特征和機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
　　 我們?cè)隗w外培養(yǎng)血

2、管內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926，將不同濃度的蟾蜍靈作用細(xì)胞0～72小時(shí)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蟾蜍靈對(duì)EAhy926細(xì)胞生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用；且在0.0625～1μmol/L范圍內(nèi)呈時(shí)間、劑量依賴性；熒光顯微鏡下可見(jiàn)0.1μmol/L的蟾蜍靈作用24 h可誘導(dǎo)EAhy926細(xì)胞凋亡，作用48 h可引起細(xì)胞部分壞死；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)出典型的“凋亡峰”，凋亡率8.2％～36.5％，且呈時(shí)間依賴性(P<0.01)；細(xì)胞周期分析顯示，0.1μmol/L蟾蜍靈能顯著

3、影響血管內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926的細(xì)胞周期，在0-36 h范圍內(nèi)G0/G1期細(xì)胞比例隨藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸遞減，而S期細(xì)胞比例隨藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增高，呈時(shí)間依賴性變化(P<0.05)；半定量RT-PCR顯示Caspase3 mRNA表達(dá)較對(duì)照組明顯增強(qiáng)(P<0.05)，Bcl-2mRNA表達(dá)較對(duì)照組明顯減弱(P<0.05)，且二者均呈劑量依賴性。激光共聚焦顯微鏡下觀察到蟾蜍靈可使EAhy926細(xì)胞內(nèi)Na+濃度升高，K+濃度降低