5-氮雜-2’-脫氧胞苷對(duì)人膀胱癌細(xì)胞系T24細(xì)胞DBCCR1基因啟動(dòng)子的去甲基化作用研究.pdf

1、目的：
　　探討DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷（5-Aza-CdR）對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株T24中DBCCR1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的影響；探討5-Aza-CdR對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株T24中DBCCR1mRNA表達(dá)水平的影響；探討5-Aza-CdR對(duì)人膀胱癌T24細(xì)胞增殖、凋亡的影響。
　　方法：
　　1、T24細(xì)胞培養(yǎng)以及藥物處理：體外培養(yǎng)人膀胱癌細(xì)胞株 T24，傳代后，分別用含不同濃度的（0、1、4、16、64

2、umol/l）甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR的RPIM1640培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)48小時(shí)。
　　2、應(yīng)用甲基化特異性 PCR（MSP）檢測(cè)5-Aza-CdR處理前后T24細(xì)胞中DBCCR1基因的甲基化狀況。
　　3、PCR法檢測(cè)在不同濃度（0、1、4、16、64umol/l）5-Aza-CdR處理膀胱癌 T24細(xì)胞48小時(shí)后T24細(xì)胞 DBCCR1mRNA的表達(dá)情況；
　　4、MTS比色法檢測(cè)經(jīng)不同濃度（1、4、16、

3、64umol/l）5-Aza-CdR處理48小時(shí)后人膀胱癌細(xì)胞株T24的生長(zhǎng)抑制作用；
　　5、應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度（1、4、16、64umol/l）的5-Aza-CdR在處理 T24細(xì)胞48h后的凋亡變化情況。
　　結(jié)果：
　　1、MSP法檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞DBCCR1基因啟動(dòng)子甲基化結(jié)果：對(duì)照組即正常條件下培養(yǎng)的T24細(xì)胞完全甲基化，經(jīng)16umol/l的甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR處理48h后，T24細(xì)胞的

4、甲基化擴(kuò)增條帶為陰性，而未甲基化擴(kuò)增條帶為陽(yáng)性。這表明膀胱癌細(xì)胞株T24中DBCCR1基因啟動(dòng)子存在高甲基化，而5-Aza-CdR可逆轉(zhuǎn) DBCCR1啟動(dòng)子的高甲基化狀態(tài)為未甲基化狀態(tài)。
　　2、經(jīng)不同濃度5-Aza-CdR處理膀胱癌T24細(xì)胞48小時(shí)后，DBCCR1基因的mRNA的表達(dá)與對(duì)照組相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。隨著藥物濃度的不斷增大，T24細(xì)胞DBCCR1基因的mRNA表達(dá)不斷增多。各組之間相比較差異具

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Welch檢驗(yàn)F=4.288,P<0.01，Dunnett T3檢驗(yàn)兩兩比較，P值均<0.05）。
　　3、5-Aza-CdR對(duì)T24細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，且各藥物處理組對(duì)T24細(xì)胞的抑制作用與對(duì)照組（藥物濃度為0）相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　4、流式細(xì)胞儀（FITC AnnexinⅤ/PI雙染法）檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞株T24經(jīng)不同濃度5-Aza-CdR藥物處理48h后，細(xì)胞出現(xiàn)明顯的凋亡。與對(duì)照