散發(fā)性結(jié)直腸癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定與染色體不穩(wěn)定研究.pdf

1、結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，腺瘤—癌的序列變化是多數(shù)結(jié)直腸癌病人的發(fā)病模式，是多種癌基因突變或抑癌基因失活改變累積的結(jié)果。研究表明結(jié)直腸癌有兩種基因組不穩(wěn)定途徑：微衛(wèi)星不穩(wěn)定途徑和染色體不穩(wěn)定途徑這兩種途徑的發(fā)現(xiàn)使結(jié)直腸癌成為一種遺傳異質(zhì)性疾病。 微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)指微衛(wèi)星序列中重復(fù)單位的獲得或缺失，多由于DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)缺陷引起，約90％HNPCC中存在，MSI在HNPCC中已經(jīng)成為的重要標(biāo)志物，但在散發(fā)性結(jié)腸癌

2、中，國內(nèi)外報(bào)道尚不一致。我們應(yīng)用熒光標(biāo)記多重PCR法擴(kuò)增微衛(wèi)星位點(diǎn)BAT25和BAT26，檢測SCRC中的微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系。細(xì)胞核DNA的含量可直接反映腫瘤細(xì)胞增殖狀態(tài)，在判斷腫瘤的惡性程度及預(yù)后方面有重要意義。我們應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測SCRC腫瘤細(xì)胞的DNA倍體，分析其與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系，并探討其與微衛(wèi)星不穩(wěn)定的關(guān)系。染色體不穩(wěn)定包括整條染色體的獲得或缺失、染色體易位、重排等，約有60％的結(jié)直腸癌

3、是經(jīng)過染色體不穩(wěn)定途徑發(fā)生的。微衛(wèi)星不穩(wěn)定與染色體不穩(wěn)定是結(jié)直腸癌基因組不穩(wěn)定的兩種主要形式，兩種類型結(jié)直腸癌在基因表達(dá)及臨床特征上都有一定差異，但兩種機(jī)制之間的關(guān)系尚不清楚。我們采用CGH技術(shù)在全基因組水平對SCRC進(jìn)行染色體變異的檢測，分析染色體變異與臨床特征之間的關(guān)系，并探討染色體變異與DNA倍體及微衛(wèi)星不穩(wěn)定的關(guān)系。本研究分為三個(gè)部分： 第一部分、散發(fā)性結(jié)直腸癌的微衛(wèi)星不穩(wěn)定研究 目的： 檢測SCRC中的

4、微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系。 方法： 將微衛(wèi)星位點(diǎn)的PCR引物在進(jìn)行熒光標(biāo)記，應(yīng)用熒光標(biāo)記多重PCR法擴(kuò)增微衛(wèi)星位點(diǎn)BAT25和BAT26，將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在熒光毛細(xì)管中進(jìn)行電泳，以GenScan3.1軟件掃描分析兩個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)狀況。 結(jié)果： 112例SCRC患者中，BAT25和BAT26兩個(gè)位點(diǎn)均陽性者14例，MSI-H發(fā)生率為12.5％(14/112)；MSI-L發(fā)生率為8.9％(

5、10/112)，其中BAT25單位點(diǎn)陽性者4例，BAT26單位點(diǎn)陽性者6例；兩個(gè)位點(diǎn)均陰性者88例，MSS發(fā)生率為78.6％。散發(fā)性結(jié)直腸癌中MSI-H和MSS兩組的比較顯示：MSI-H者發(fā)病部位以近端結(jié)腸癌多見(P=0.034)，組織學(xué)類型以粘液腺癌、印戒細(xì)胞癌相對多見(P=0.023)，分化程度以低分化癌多見(P=0.039)，而MSI-H與MSS兩者在性別、年齡、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等方面無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

6、第二部分、散發(fā)性結(jié)直腸癌的DNA倍體分析 目的： 檢測結(jié)直腸癌患者腫瘤細(xì)胞的DNA含量，探討DNA倍體與結(jié)直腸癌臨床病理特征及微衛(wèi)星不穩(wěn)定的關(guān)系。 方法： 應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測40例SCRC(14例MSI-H，26例MSS)腫瘤細(xì)胞的DNA倍體。 結(jié)果： 40例結(jié)直腸癌標(biāo)本中，二倍體為17例，占42.5％，異倍體為23例，異倍體的比例為57.5％。散發(fā)性結(jié)直腸癌的DNA倍體與患者的性別、年齡

7、及組織學(xué)類型無明顯相關(guān)性。直腸癌的異倍體發(fā)生率高于結(jié)腸癌，低分化癌異倍體發(fā)生率高于高、中分化癌，但均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。DNA倍體與患者的的TNM分期有密切關(guān)系，分期越高，異倍體的比例越高，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P=0.005)。MSI-H的SCRC多為二倍體(71.4％)，而MSS組多為異倍體(73.1％)，兩組的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。 第三部分、比較基因組雜交研究散發(fā)性結(jié)直腸癌的染色體變異

8、目的： 檢測散發(fā)性結(jié)直腸癌的染色體變異，并了解其與臨床病理特征、DNA倍體及微衛(wèi)星不穩(wěn)定之間的關(guān)系。 方法： 采用CGH技術(shù)在全基因組水平對40例SCRC(14例MSI-H，26例MSS)進(jìn)行染色體變異的檢測。 結(jié)果： 在CGH檢測的40例散發(fā)性結(jié)直腸癌中，所有病例均有不同程度的染色體臂發(fā)生擴(kuò)增或丟失。平均每例變異數(shù)為7.55，其中擴(kuò)增數(shù)為4.73，丟失數(shù)為2.83。常見的染色體擴(kuò)增區(qū)域有：20q

9、、12q、13q、7p、7q和16q。常見缺失區(qū)域有18q、5q、4q、8p和17p。TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期結(jié)直腸癌的染色體總變異數(shù)和擴(kuò)增數(shù)、缺失數(shù)均高于Ⅰ、Ⅱ期。腫瘤部位、組織學(xué)類型、分化程度等與染色體總變異數(shù)、擴(kuò)增數(shù)和丟失數(shù)之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。20q的擴(kuò)增與TNM分期有關(guān)，其他常見擴(kuò)增或缺失區(qū)域與結(jié)直腸癌的臨床分期之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。二倍體腫瘤的染色體總變異數(shù)及缺失數(shù)明顯少于異倍體，各染色體區(qū)域之間未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MSI-H腫瘤

10、的染色體總變異數(shù)及缺失數(shù)少于MSS腫瘤。MSS腫瘤中20q擴(kuò)增和17p缺失明顯高于MSI-H，其余染色體區(qū)域未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.MSI是SCRC常見的分子事件，MSI-H者具有獨(dú)特的臨床病理特征。 2.SCRC中存在二倍體與異倍體，異倍體的比例與患者的的TNM分期有關(guān)。MSI-H的SCRC多為二倍體，MSS多為異倍體。 3.染色體變異在SCRC中普遍存在，比DNA倍體的異常更為常見。