結(jié)直腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究及黃芩等中藥對(duì)錯(cuò)配修復(fù)基因突變表型的影響.pdf

1、本研究應(yīng)用熒光多重PCR和Genescan方法研究中國(guó)人結(jié)直腸癌患者M(jìn)SI變異情況和臨床特征，以及黃芩、穿心蓮等中藥對(duì)錯(cuò)配修復(fù)基因突變表型的影響，為中國(guó)人MSI結(jié)直腸癌遴選、發(fā)生機(jī)理和中藥治療的研究提供依據(jù)。第一部分中國(guó)人結(jié)直腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究目的 研究中國(guó)人結(jié)直腸癌MSI變異情況和MSI結(jié)直腸癌的臨床病理生物學(xué)特征。 方法 應(yīng)用熒光多重PCR結(jié)合Genescan方法在105例結(jié)直腸癌初診患者中檢測(cè)5個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)，篩選MS

2、I結(jié)直腸癌。分析MSI結(jié)直腸癌潛在的相關(guān)臨床病理生物學(xué)特征，包括腫瘤診斷年齡、性別、位置、病理性質(zhì)、組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(0、1-3、≥4)。 結(jié)果105結(jié)直腸癌中，MSI檢出率24.7％，其中MSI-H14例(13.3％)，MSI-L12例(11.4％)；隊(duì)列中各位點(diǎn)突變率分別是D5S346(5.7％)、BAT26(8.6％)、BAT25(10.5％)、D17S250(8.6％)、D2S123(10.5％)；MSI檢出

3、頻率在低年組(31.8％)和高年組(26.2％)高于中位年齡組(19.5％)；結(jié)腸癌患者(34.2％)MSI檢出率明顯高于直腸癌患者(19.4％)；粘液腺癌組(33.3％)MSI檢出率高于腺癌組(22.6％)：低分化組(38.2％)中MSI檢出頻率明顯高于中分化組(18.2％)與高分化組(18.8％)：MSI結(jié)直腸癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為15.3％，MSS結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為29.15％。MSI結(jié)直腸癌的組織分化程度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與MSS結(jié)直

4、腸癌有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，而年齡、腫瘤位置、病理性質(zhì)與MSI檢出率無(wú)顯著臨床意義(P>0.05)。 結(jié)論 中國(guó)人MSI結(jié)直腸癌檢出率為24.％；MSI結(jié)直腸癌有其獨(dú)特的臨床生物學(xué)特征，具有低分化癌多見(jiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移少等特點(diǎn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移少可能是MSI結(jié)直腸癌具有生存優(yōu)勢(shì)的原因之一。第二部分 黃芩等中藥對(duì)錯(cuò)配修復(fù)基因缺失結(jié)腸LoVo細(xì)胞的作用研究[摘要]目的 研究黃芩、穿心蓮誘導(dǎo)錯(cuò)配修復(fù)基因hMSH2缺失的結(jié)腸LoV

5、o細(xì)胞凋亡作用，觀察中藥對(duì)MSI表型的影響，探討黃芩、穿心蓮對(duì)LoVo細(xì)胞的作用機(jī)理。方法采用體外培養(yǎng)技術(shù)、TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡率、變性凝膠電泳檢測(cè)微衛(wèi)星標(biāo)志BAT-25、D2S123狀況。 結(jié)果黃芩、穿心蓮、阿斯匹林均能誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞和HCT-8細(xì)胞凋亡，與對(duì)照組有顯著差異(p<0.001)：陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)志指數(shù)視不同的藥物而存在較大的差異，黃芩對(duì)結(jié)腸LoVo細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用較穿心蓮強(qiáng)(p<0.01)，其作用時(shí)間在96h達(dá)

6、到高峰，與時(shí)間不呈依賴關(guān)系；相同濃度黃芩作用于LoVo細(xì)胞較HCT-8細(xì)胞強(qiáng)，兩組細(xì)胞間存在顯著差異(p<0.01)。穿心蓮誘導(dǎo)結(jié)腸HCT-8細(xì)胞凋亡的作用較黃芩和阿斯匹林強(qiáng)(p<0.01)，且呈時(shí)間依賴，一周時(shí)全部細(xì)胞凋亡，與相同濃度的穿心蓮作用于LoVo細(xì)胞相比存在顯著差異(p<0.01)。LoV0細(xì)胞表現(xiàn)為MSI，HCT-8細(xì)胞表現(xiàn)為MSS，黃芩、穿心蓮對(duì)兩組細(xì)胞的微衛(wèi)星狀態(tài)沒(méi)有影響。 結(jié)論 黃芩、穿心蓮能夠誘導(dǎo)Lovo