慢腎康寧對UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化中TGF-β1-Smad3信號調(diào)控的miR-21、miR-29表達的影響.pdf

1、目的：觀察中藥復(fù)方慢腎康寧對UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化中TGF-β1/Smad3信號通路介導(dǎo)的miR-21、miR-29表達的影響。
　　方法：60只成年雄性Wistar大鼠在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重隨機分為六組（n=10），分別為正常對照組(正常組)、假手術(shù)組、UUO模型組（模型組）、纈沙坦組、慢腎康寧高劑量組（MGH組）和慢腎康寧組（MG組）。模型組和各藥物組予行UUO術(shù)造模，于左腎下極處結(jié)扎后離斷輸尿管；假手術(shù)組不結(jié)扎離斷輸尿管

2、，僅游離輸尿管后即關(guān)閉腹腔。術(shù)后3天連續(xù)腹腔注射青霉素用以預(yù)防感染。各組均于術(shù)前3天開始灌胃給藥，纈沙坦組給予纈沙坦8mg·k g-1·d-1，MGH組給予慢腎康寧30g·kg-1·d-1，MG組給予慢腎康寧15g·kg-1·d-1，余各組予等量生理鹽水灌胃，給藥時間為2周。術(shù)后第12天處死大鼠，腹主動脈取血用于檢測CREA和BUN；記錄體重及雙腎濕重；取左側(cè)腎組織行HE染色和Masson染色，光鏡下觀察其病理改變；免疫組化方法檢測左腎

3、組織TGF-β1、p-Smad3蛋白表達情況；逆轉(zhuǎn)錄PCR方法檢測左腎組織TGF-β1、Smad3、Vimentin mRNA和miR-21、miR-29的表達情況。
　　結(jié)果：HE染色顯示，正常組及假手術(shù)組左腎組織結(jié)構(gòu)正常；模型組左腎組織結(jié)構(gòu)錯亂，小管間隙增寬，內(nèi)有大量炎性細胞浸潤，Masson染色可見大量膠原纖維交織呈網(wǎng)狀，間質(zhì)纖維化嚴重；各藥物組與模型組相比較，腎間質(zhì)中炎性浸潤及膠原面積減少，間質(zhì)纖維化程度明顯改善。各藥物組

4、腎重/體重值相比模型組均有不同程度的下降（P<0.05)。造模組與假手術(shù)組相比，CREA及BUN值均有不同程度升高(P<0.01)，各治療組與模型組相比結(jié)果無統(tǒng)計學意義，但有下降趨勢。免疫組化顯示，各藥物組相比模型組，TGF-β1、p-Smad3蛋白表達顯著下降（P<0.01)，MGH組與纈沙坦組優(yōu)于MG組(P<0.01)。Real-time PCR顯示，各藥物組相比模型組，TGF-β1、Smad3、Vimentin mRNA和miR-

5、21表達水平均有不同程度的下調(diào)（P<0.05)，miR-29表達水平上調(diào)（P<0.05)。
　　結(jié)論：UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化模型中TGF-β1/Smad3信號通路被激活；慢腎康寧能抑制UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化模型中TGF-β1/Smad3信號通路，下調(diào)TGF-β1、Smad3、miR-21的表達，上調(diào)miR-29的表達；慢腎康寧能減輕腎間質(zhì)纖維化，下調(diào)Vimentin的表達，這一過程可能是通過抑制TGF-β1/Smad3信號介導(dǎo)的m