左-卡尼汀心肌保護(hù)作用的實驗與臨床研究.pdf

1、目的 探討左-卡尼汀(L-CN)預(yù)處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷(MIRI)的影響和L-CN作為心停搏液成份進(jìn)行冠狀動脈間斷順行灌注對犬體外循環(huán)(CPB)心肌的保護(hù)作用，最后將L-CN應(yīng)用于風(fēng)濕性心臟病心瓣膜替換術(shù)患者，探討其心肌保護(hù)作用的可能機制。 方法 1.36只Wistar大鼠隨機分為3組，每組n=12。(1)左-卡尼汀治療組(L-CN)：術(shù)前給予L-CN200mg·kg-1·d-1腹腔注射給藥3天；(2)缺

2、血-再灌注組(IR)：術(shù)前給予等量生理鹽水腹腔注射3天；(3)假手術(shù)組(S)：術(shù)前處理同IR組。L-CN和IR兩組大鼠在心電監(jiān)護(hù)下結(jié)扎左冠狀動脈前降支(LAD)30min后，松開結(jié)扎線恢復(fù)心肌血流灌注3h處死動物，S組除LAD僅穿線不結(jié)扎外，所有操作同前兩組。(1).記錄三組術(shù)中心律失常情況。(2).三組均于術(shù)前和處死動物前從頸動脈抽血觀察血清心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。(3).實驗結(jié)

3、束處死大鼠前留取心肌標(biāo)本，光鏡下觀察其病理學(xué)改變；免疫組織化學(xué)方法檢測心肌組織早期凋亡蛋白Fos和Jun的表達(dá)，TUNEL法測定心肌細(xì)胞的凋亡指數(shù)；電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)變化。 2.20只雄性健康成年雜種犬，隨機分為實驗組和對照組，每組n=10。實驗組術(shù)中于4℃ST.ThomasⅡ號心停搏液中按12g/L加入L-CN；對照組以等量生理鹽水代替L-CN加入到ST.ThomasⅡ號冷晶體液中作為心停搏液，其它條件同治療組。升主動脈每阻

4、斷30min灌注一次，共4次，末次灌注液中氯化鉀濃度減半。升主動脈阻斷時，采集冠狀靜脈竇血清檢測cTnI、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)水平，取左心室心肌檢測MDA和三磷酸腺苷(ATP)含量以及SOD活性。Westernblot法分析腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)的裂解情況。 3.69例風(fēng)濕性心臟病CPB下行心瓣膜替換術(shù)患者隨機分為治療Ⅰ組(n=22)、治療Ⅱ組(n=24)和對照組(n=23)。治療Ⅰ組術(shù)中按12g/L加入

5、L-CN于ST.ThomasⅡ號冷晶體心麻痹液中，治療Ⅱ組為6g/L，對照組以生理鹽水代替L-CN加入到ST.ThomasⅡ號冷晶體液中作為心停搏液(對照組與治療Ⅱ組加生理鹽水后的總量同治療Ⅰ組的總量)，三組其它條件相同。觀察3組術(shù)畢和術(shù)后血管活性藥物用量；監(jiān)測圍術(shù)期心肌酶和血漿基質(zhì)金屬蛋白酶變化；術(shù)前1d，術(shù)后7d作心臟彩超了解心臟指數(shù)(CI)、左心射血分?jǐn)?shù)(EF)；心內(nèi)操作完畢后取心肌觀察其組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變，用免疫組織化學(xué)及TENE

6、L法檢測細(xì)胞凋亡，提取心肌細(xì)胞線粒體檢測其功能。 結(jié)果 第一部分： 1.L-CN組術(shù)中室性心動過速或心室纖顫事件明顯少于IR組(P＜0.01)。2.處死動物前，IR組MDA、cTnI高于L-CN組(P＜0.01)，而SOD低于L-CN組(P＜0.01)。 3.IR組Fos和Jun蛋白表達(dá)陽性率明顯高于L-CN組(P＜0.01)。IR組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于L-CN組(P＜0.05)。 4.組織形

7、態(tài)學(xué)觀察(電鏡)：IR組心肌纖維大部分?jǐn)嗔?，線粒體腫大，部分溶解，糖原顆粒消失；L-CN組心肌纖維扭曲，但結(jié)構(gòu)基本完整，線粒體腫脹，可見少量糖原顆粒。 第二部分： 1.升主動脈開放時，實驗組cTnI、CK-MB和MDA均低于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，SOD和ATP則高于對照組(P＜0.05)。 2.與對照組比較，實驗組術(shù)畢心臟自動復(fù)跳率明顯升高(P＜0.01)。 3.Westernblot法分

8、析腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)的裂解情況，兩組術(shù)畢心肌均有PARP完整的113KD被水解為89KD的片段，但實驗組被水解的PARP完整片段明顯少于對照組。 第三部分： 1.治療組患者術(shù)畢和術(shù)后血管活性藥物用量明顯少于對照組(P＜0.01)，但兩治療組比較差異無顯著性(P＞0.05)。血清cTnⅠ、AST、LDH、CK及CK-MB水平從轉(zhuǎn)流畢到術(shù)后3d明顯低于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，其中治療Ⅰ組cTnⅠ

9、明顯低于治療Ⅱ組(P＜0.05或P＜0.01)。治療組患者術(shù)畢心臟自動復(fù)跳率明顯高于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，兩治療組比較無顯著性差異(P＞0.05)。術(shù)后7d，治療組CI、EF明顯高于對照組(P＜0.05)，但兩治療組組間比較無顯著性差異(P＞0.05)。心內(nèi)操作完畢后治療組心肌超微結(jié)構(gòu)顯示心肌細(xì)胞內(nèi)線粒體無明顯腫脹，肌纖維完整，而對照組線粒體腫大，內(nèi)有多個空泡形成，部分線粒體嵴斷裂，糖原顆粒消失，肌纖維斷裂。 2

10、.治療Ⅰ組患者血漿MMP-2從轉(zhuǎn)流20min到術(shù)后1d明顯低于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，其中從轉(zhuǎn)流畢到術(shù)后1d明顯低于治療Ⅱ組(P＜0.05或P＜0.01)；治療Ⅰ組患者血漿MMP-9從轉(zhuǎn)流20min到轉(zhuǎn)流畢明顯低于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，兩治療組之間比較差異無顯著性(P＞0.05)。 3.與對照組比較，停機后兩治療組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯降低(P＜0.01)；Bax蛋白表達(dá)減弱，而Bcl-2蛋白表達(dá)增

11、強，Bcl-2/Bax升高(P＜0.05或P＜0.01)。與轉(zhuǎn)流前比較，停機后3組Bax蛋白表達(dá)均增強，對照組Bcl-2蛋白表達(dá)減弱(P＜0.05或P＜0.01)。 4.停機后，兩實驗組心肌線粒體SOD、GSH-PX活性顯著高于對照組(P＜0.05或P＜0.01)，而iNOS活性、MDA及NO含量則明顯降低于對照組(P＜0.05或P＜0.01)。 結(jié)論 1.L-CN預(yù)處理可減少MIRI大鼠室性心動過速或心室纖顫事