蜜蜂球囊菌ND-2淀粉酶和脂肪酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、利用Plackett-Burman設(shè)計(jì)和響應(yīng)面優(yōu)化方法，對蜜蜂球囊菌ND-2搖瓶生產(chǎn)淀粉酶和脂肪酶的培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化，以提高其生產(chǎn)量。
　　淀粉酶優(yōu)化后的產(chǎn)淀粉酶培養(yǎng)基組成為麥芽糖45.99g/l,CaCl21.51g/l,pH值6.6，酶活力達(dá)到46.25U/ml，與優(yōu)化前的培養(yǎng)基相比，酶活力提高10.52倍。
　　產(chǎn)淀粉酶發(fā)酵上清液經(jīng)過硫酸銨沉淀、透析、PEG20000濃縮、DEAE-52陰離子交換柱和Sephadex

2、 G-100凝膠過濾等步驟，得到的淀粉酶純化了2.3倍，產(chǎn)率達(dá)到36.53％。
　　經(jīng)過SDS-PAGE電泳檢測，淀粉酶的分子質(zhì)量為75kDa。該淀粉酶的最適溫度和pH分別為55℃和7.5，穩(wěn)定的溫度范圍為30-55℃，穩(wěn)定的pH范圍為6-10。Fe2+對淀粉酶酶活性有明顯的激活作用，K+、Fe3+和Na+對淀粉酶有微弱的抑制作用，Mg2+、Ca2+和Zn2+對淀粉酶活性展示出較強(qiáng)的抑制作用，Cu2+、Mn2+和Ba2+對淀粉酶活

3、性無抑制作用。供試的有機(jī)溶劑對淀粉酶活性都有不同程度的抑制作用，僅二甲基亞砜對淀粉酶幾乎沒有抑制作用。該淀粉酶的動(dòng)力學(xué)常數(shù)Km和Vmax分別為2.13mg·ml-1和1.44mg·ml-1·min-1。經(jīng)TLC鑒定，該淀粉酶為α-淀粉酶。發(fā)酵罐擴(kuò)大發(fā)酵，淀粉酶產(chǎn)量比在搖瓶中高。
　　脂肪酶在以乳化橄欖油作為誘導(dǎo)劑的條件下，優(yōu)化后的產(chǎn)脂肪酶培養(yǎng)基組成包括乳化橄欖油50g/l、酵母浸粉3.88g/l、NaCl0.713g/l和VB20

4、.34g/l。酶活力達(dá)到22.19U/ml，與優(yōu)化前的培養(yǎng)基相比，酶活力提高3.38倍。
　　脂肪酶發(fā)酵液經(jīng)過硫酸銨沉淀、透析、PEG20000濃縮和Sephadex G-100凝膠過濾，脂肪酶純化了34.15倍，產(chǎn)率為33%。
　　通過SDS-PAGE電泳檢測，該酶分子質(zhì)量達(dá)到54kDa。該脂肪酶的最適溫度和pH值分別為55℃和7.5，在溫度范圍30-55℃和pH值3-10較穩(wěn)定。Fe2+、Fe3+和K+能增加脂肪酶的活性