姜黃素對(duì)人食管癌EC9706細(xì)胞增殖、侵襲的影響.pdf

1、目的:
　　 本實(shí)驗(yàn)觀察了姜黃素在體外對(duì)食管癌細(xì)胞系EC9706細(xì)胞的作用，研究姜黃素是否對(duì)食管癌細(xì)胞系EC9706細(xì)胞具有增殖抑制作用，及姜黃素對(duì)食管癌細(xì)胞系EC9706細(xì)胞侵襲及增殖的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制，為進(jìn)一步探索研究姜黃素的抗腫瘤作用打下良好的基礎(chǔ)。
　　 材料與方法:
　　 1、細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)（姜黃素對(duì)人食管癌細(xì)胞作用的體外實(shí)驗(yàn)研究）采用MTT法，將對(duì)數(shù)生長期的EC9706細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度為

2、1.0×105/ml（常規(guī)培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞系EC9706細(xì)胞），待貼壁生長后分為三組：①實(shí)驗(yàn)組：加入姜黃素使終濃度分別為40、80、120、160μmol/L:②陰性對(duì)照組：加入RPMI-1640培液；③溶劑對(duì)照組：加入0.1％DMSO。每組設(shè)12個(gè)復(fù)孔，分別于姜黃素干預(yù)24、48、72h，檢測(cè)各組細(xì)胞增殖抑制率的差異。
　　 2、ETS1及MMP9mRNA在姜黃素處理前后的表達(dá)變化采用RT-PCR檢測(cè)常規(guī)培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞系EC

3、9706細(xì)胞，對(duì)照組加入RPMI-1640培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組加入終濃度為40、80、120、160μmol/L的姜黃素分別作用于細(xì)胞48h及72h后，各收集對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組3瓶EC9706細(xì)胞，用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)ETS1及MMP9mRNA表達(dá)情況。
　　 3、用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)姜黃素對(duì)食管癌細(xì)胞系EC9706細(xì)胞ETS1及MMP9蛋白表達(dá)的影響。
　　 4、所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料率

4、的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用x2檢驗(yàn)，多組間的比較采用單因素方差分析。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，當(dāng)P＜0.05時(shí)才認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、MTT:結(jié)果表明姜黃素對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞具有增殖抑制作用，且呈濃度及時(shí)間依賴性，差異有顯著性（P＜0.05）。姜黃素處理24、48和72小時(shí)后的IC50分別為206.3μmol/L，135.3μmol/L和98.4μmol/L。160μmol/L姜黃素作用72小時(shí)后

5、，EC9706細(xì)胞增殖幾乎停滯。
　　 2、RT-PCR示姜黃素作用過的EC9706細(xì)胞Ets-1及MMP9mRNA的表達(dá)量隨姜黃素濃度的增加而逐漸降低，同時(shí)在120μmol/L的姜黃素作用下，二者的表達(dá)量隨著時(shí)間的延長而逐漸降低。
　　 3、用姜黃素處理后，EC9706細(xì)胞Ets-1、MMP9蛋白的表達(dá)量都下降，且兩者之間具有相關(guān)性，相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.721，P＜0.05)
　　 結(jié)論: