干預(yù)OX40-OX40L軸對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖及分泌細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的:
　　 本研究觀(guān)察(1)OX40-OX40L相互作用對(duì)C57BL/6小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2、IL-4、INF-γ細(xì)胞因子含量及淋巴細(xì)胞中活化T細(xì)胞核因子C1(NFATcl)表達(dá)的影響,(2)用環(huán)孢素A(CSA)阻斷NFATcl后觀(guān)察OX40-OX40L對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖及細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2、IL-4、INF-γ細(xì)胞因子表達(dá)的影響。探討OX40-OX40L相互作用是否通過(guò)NFATcl促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞活

2、化。
　　 方法:
　　 取C57BL/6小鼠脾淋巴細(xì)胞,以不同濃度刺激型OX40抗體上調(diào)OX40-OX40L相互作用,另以不同濃度抑制型OX40L抗體下調(diào)OX40-OX40L相互作用,不同時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞,應(yīng)用MTT法檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖;ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2、IL-4、INF-γ細(xì)胞因子含量;以實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中INF-γ在mRNA水平的表達(dá);流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞中NFATcl

3、蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 (1)anti-OX40特異性刺激OX40-OX40L軸后,小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖增強(qiáng),分泌IL-2和INF-γ含量明顯增加,IL-4含量無(wú)明顯變化,淋巴細(xì)胞中NFATcl蛋白表達(dá)明顯上調(diào),anti-OX40(20μg/ml)時(shí)刺激作用最強(qiáng),刺激時(shí)間48h最佳。
　　 (2)anti-OX40L特異性阻斷OX40-OX40L軸后,淋巴細(xì)胞增殖、分泌細(xì)胞因子IL-2和INF-γ含量及