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1、目的:觀察蘆薈多糖對(duì)體外培養(yǎng)人表皮細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌的影響,探討其在創(chuàng)面愈合過(guò)程新生上皮重建中的作用。 方法: 1、體外培養(yǎng)表皮細(xì)胞隨機(jī)分為蘆薈多糖組(25,50,100,200,400mg/L)和對(duì)照組。通過(guò)MTT法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法和細(xì)胞融合時(shí)間以及[<'3>H]-TdR滲入量觀察細(xì)胞增殖狀況,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期,熒光標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,LDH漏出率反映細(xì)胞損傷程度,光鏡和電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)。
2、 2、ELISA和RIA法測(cè)定表皮細(xì)胞分泌生長(zhǎng)因子(TGF-α、EGF和TGF-β<,1>)和炎癥因子(IL-1β、IL-6、IL-8和TNF)水平,Green法測(cè)定表皮細(xì)胞分泌NO水平。 結(jié)果: 1、倒置相差顯微鏡觀察到,各組表皮細(xì)胞形態(tài)基本相似,透射電鏡下觀察蘆薈多糖組細(xì)胞增殖活躍,核內(nèi)以常染色質(zhì)為主,對(duì)照組以異染色質(zhì)為主;與對(duì)照組比較,蘆薈多糖組細(xì)胞增殖達(dá)峰值的時(shí)間較對(duì)照組提前1~2 d,細(xì)胞倍增指數(shù)顯著上升,
3、細(xì)胞融合時(shí)間明顯縮短28~58 h,[<'3>H]-TdR滲入量顯著升高(P-<0.05),并呈劑量依賴(lài)性。 2、與對(duì)照組比較,蘆薈多糖作用后表皮細(xì)胞[Ca<'2+>]i水平略有升高(P<0.05),G0/G1期細(xì)胞比例下降,G2/M期和S期細(xì)胞比例明顯增高(P<0.05), LDH漏出率均有不同程度地下降(P<0.05)。 3、與對(duì)照組比較,蘆薈多糖作用后表皮細(xì)胞分泌TGF-α、EGF、tGF-β1和 IL-1β、IL
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