NF-κB“圈套”對(duì)癲癇大鼠腦內(nèi)COX-2調(diào)控作用的研究.pdf

1、癲癇(Epilepsy)給患者帶來(lái)的巨大傷害是由癲癇反復(fù)發(fā)作(Seizure)所引起的腦損傷，而癲癇的腦損傷的主要原因是由癲癇發(fā)作所引起的腦內(nèi)炎癥反應(yīng)。關(guān)于癲癇的腦內(nèi)炎癥反應(yīng)機(jī)制，近年來(lái)的研究報(bào)道顯示，癲癇的炎癥反應(yīng)與腦內(nèi)環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)的表達(dá)增加及前列腺素(PGs)水平增高有著密切關(guān)系，COX-2為PGs合成的限速酶，被激活后不僅可產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，還可將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為PGs等有害物質(zhì)，雖

2、然COX-2可被促炎性因子和某些與炎癥反應(yīng)有關(guān)的生長(zhǎng)因子所誘導(dǎo)，但在中樞神經(jīng)系統(tǒng)及癲癇動(dòng)物腦內(nèi)COX-2的激活調(diào)節(jié)機(jī)制還并不十分清楚。 核轉(zhuǎn)錄因子(NF-кB)的激活可高效誘導(dǎo)靶基因的轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)著諸多參與免疫、炎癥反應(yīng)因子如細(xì)胞粘附分子、細(xì)胞因子等的表達(dá)，在炎癥和免疫反應(yīng)中起著調(diào)控作用，已有研究證明在癲癇的腦損傷中NF-кB起著重要作用。但是在癲癇發(fā)作過(guò)程中是否由于NF-кB的激活，從而調(diào)控了其下游靶基因之一COX-2的高表達(dá)，

3、才導(dǎo)致了腦內(nèi)的炎癥反應(yīng)和一系列病理變化尚無(wú)明確報(bào)道。 目的：本研究設(shè)計(jì)并合成與核轉(zhuǎn)錄因子NF-кB順式元件相一致的雙鏈寡聚脫氧核苷酸(кB-decoy)和相應(yīng)的無(wú)關(guān)序列(錯(cuò)配-decoy)，用這種核轉(zhuǎn)錄因子“圈套”策略抑制NF-кB的活性，通過(guò)研究癲癇大鼠腦內(nèi)NF-кB的活性被抑制時(shí)COX-2的表達(dá)情況，明確癲癇的腦損傷病理變化與NF-кB活性和COX-2表達(dá)的相關(guān)性以及NF-кB在癲癇中對(duì)COX-2表達(dá)的調(diào)控作用，以進(jìn)一步了解

4、癲癇的腦內(nèi)病理改變機(jī)制。 方法：選用體重為250-300g的健康成年SD雄性大鼠，將其隨機(jī)分為3組即(1)實(shí)驗(yàn)組(注射кB-decoy組)、(2)對(duì)照組(注射錯(cuò)配-decoy組)、(3)正常組(注射生理鹽水組)。кB-decoy-ExGen500復(fù)合物和錯(cuò)配-decoy-ExGen500復(fù)合物由大鼠腦立體定位儀于腦室內(nèi)微量注射，采用氯化鋰。匹羅卡品(40mg/kg)制備大鼠癲癇模型，癲癇發(fā)作后選取不同的時(shí)間點(diǎn)的大鼠灌流固定，免疫

5、組化方法測(cè)定NF-kB和COX-2在腦內(nèi)癲癇敏感腦區(qū)的活性，RT-PCR測(cè)定COX-2的表達(dá)。 結(jié)果：NF-kBp65免疫組化結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回門(mén)區(qū)神經(jīng)元胞漿中免疫陽(yáng)性染色明顯增強(qiáng)； NF-kB未發(fā)生核轉(zhuǎn)移，其活性被抑制。COX-2免疫組化結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠海馬神經(jīng)元的免疫陽(yáng)性染色明顯減弱；COX-2的表達(dá)水平低于對(duì)照組。RT-PCR結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，在癲癇