刺參體內(nèi)硒的分離測定及外源硒對其生物學(xué)指標的影響.pdf

1、本文對刺參(Apostichopus japonicas)體內(nèi)無機硒及有機硒的分離提取工藝進行了優(yōu)化，建立了無機硒和有機硒的分離方法，進而進行了不同地區(qū)刺參群體不同組織內(nèi)硒形態(tài)的初步分析，并研究了不同濃度的外源硒對刺參的生物學(xué)影響，為研發(fā)一種新型綠色水產(chǎn)動物免疫增強劑以及獲得天然安全的富含有機硒的刺參提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容包括：
　　一、無機硒和有機硒的分離方法的建立與優(yōu)化
　　硒具有提高人體免疫力，對有害物質(zhì)的解毒及抗

2、衰老作用，是人體所需要的重要微量營養(yǎng)元素之一。硒特殊的生理、生化功能不僅取決于其總濃度水平，而且同硒存在的化學(xué)形態(tài)以及不同化學(xué)形態(tài)下硒化物的濃度水平密切相關(guān)，無機硒的毒性遠遠大于有機硒，因此采用準確有效的測定總硒及無機硒含量的方法非常重要。
　　本文通過比較和實驗，采用HCl水浴提取法、Tris-HCl-甘油提取法、透析袋透析法及超純水超聲破碎法四種方法進行有機硒和無機硒分離，確定了超純水超聲破碎法浸提無機硒的效果最好。首次通過改

3、變超聲破碎的時間、設(shè)置不同的水浴時間及水浴溫度、改變環(huán)己烷萃取次數(shù)的技術(shù)參數(shù)，確立了從刺參樣品中提取硒的最優(yōu)條件，建立和優(yōu)化了無機硒與有機硒的分離方法，并對測定分析方法進行了方法檢出限計算及回收率、精密度實驗，在優(yōu)化的工作條件下，硒濃度為0~30μg/L，與熒光強度有良好的線性關(guān)系，線性方程為I=133.06*C+21.76，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，最低檢出限為0.0005 ng/mL；樣品總硒的回收率達到95.43％～99.74%，

4、相對標準偏差為2.48%～5.26%，無機硒的回收率達到92.25%～95.36%，相對標準偏差為2.73%～6.10%，以上結(jié)果表明，測定總硒及無機硒的方法準確度高，重復(fù)性好，通過差減法得到的樣品的有機硒含量是真實可信的，同時國家標準物質(zhì)測定值在標準值允許誤差范圍內(nèi)，說明該方法準確、可靠，能夠滿足水產(chǎn)品中總硒的檢測要求。
　　二、采用氫化物原子熒光法(HG-AFS)分析不同地區(qū)刺參總硒和無機硒的含量及分布規(guī)律
　　人體內(nèi)的

5、硒元素主要是通過吸收食物中的硒而獲得，并通過機體的代謝過程將其轉(zhuǎn)化為機體所能利用的形式。而水產(chǎn)品刺參體內(nèi)的硒含量較高，尤其是可被機體利用的有機硒的含量相當豐富。但刺參體內(nèi)硒的研究還是比較薄弱，刺參各組織中有機硒和無機硒的比例如何、不同組織間和不同地區(qū)間硒含量有何差異以及硒對刺參的生物學(xué)作用等方面還缺乏相關(guān)研究。本研究旨在探明環(huán)境中硒對刺參體內(nèi)硒含量的影響及不同形態(tài)的硒在各組織中的富集代謝情況，為進一步進行分子生物學(xué)方面的研究提供參考。<

6、br>　　本文首次以黃渤海域大連、東營、煙臺、青島、日照五個典型地區(qū)刺參群體為研究對象（取樣時間為2014年4月份），應(yīng)用氫化物原子熒光法對刺參體內(nèi)不同組織硒形態(tài)分布進行了初步分析，并比較了不同地區(qū)間及不同組織間硒含量差異。結(jié)果顯示，呼吸樹為總硒和無機硒含量最高的組織，平均值為14.17±3.41mg/kg和6.19±3.83mg/kg，不同組織內(nèi)的總硒、無機硒含量變化呈現(xiàn)一致的規(guī)律，硒含量由高到低為：呼吸樹＞消化道＞肌肉＞內(nèi)壁＞外壁，

7、同時刺參體壁和肌肉（食用部分）中有機硒比例在75.63%～89.41%之間（除東營地區(qū)刺參群體肌肉組織的有機硒比例最低為53.64%）；五個地區(qū)刺參群體同一組織內(nèi)的總硒及無機硒含量均有顯著性差異，東營地區(qū)呼吸樹、消化道和肌肉中無機硒含量較高。
　　三、不同水平的外源硒對刺參生物學(xué)指標及硒含量的影響
　　對于水產(chǎn)動物而言，元素硒同樣具有多種重要的生理功能。刺參養(yǎng)殖過程中，大量用藥及濫用抗生素類藥物嚴重危害人類的健康，帶來細菌耐

8、藥性及藥物殘留引起的環(huán)境污染等問題。研究表明適量添加外源硒可以增強水產(chǎn)動物的免疫功能，從而提高其抗病能力。本文開展了不同硒濃度的養(yǎng)殖實驗，通過測定刺參成活率及相關(guān)酶的活性來研究硒對刺參的生物學(xué)影響，旨在探索硒在提高刺參的健康指標的作用；此外，通過測定刺參不同組織的硒含量，以探討硒在體內(nèi)的分布及轉(zhuǎn)化問題，發(fā)現(xiàn)刺參體內(nèi)的硒含量變化規(guī)律，同時獲得高活性的有機硒，緩解缺硒現(xiàn)狀。
　　本文以我國北方重要養(yǎng)殖經(jīng)濟品種刺參為研究對象，采取逐級放

9、大的方法進行在飼料中添加不同硒濃度梯度（0mg/kg、0.20mg/kg、0.40mg/kg、0.80mg/kg、1.60mg/kg、3.20mg/kg、6.40mg/kg）的富硒酵母的養(yǎng)殖試驗，養(yǎng)殖4W后測定刺參的生物學(xué)指標及硒含量變化。結(jié)果顯示：添加適宜濃度硒可以提高刺參的成活率（最高達100%）及消化酶的活性，蛋白酶、淀粉酶活性最高分別為35.13U/mg prot、0.51U/mg prot，分別為對照組的2.45、2.07倍；