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1、硒(Selenium,Se)元素是機(jī)體必需的微量元素之一,具有抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)能力等重要生物學(xué)功能。本研究通過(guò)女貞樹(shù)盛花期葉面噴施亞硒酸鈉而收獲富硒女貞子,并對(duì)其生物學(xué)功效開(kāi)展相關(guān)研究。主要內(nèi)容包括:富硒女貞子的制備、營(yíng)養(yǎng)成分及生物活性成分的測(cè)定、富硒女貞子安全性試驗(yàn)、富硒女貞子對(duì)雜交瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)及動(dòng)物免疫功能的影響。
試驗(yàn)一富硒女貞子的生產(chǎn)及礦物元素測(cè)定2009年6月女貞樹(shù)盛花期通過(guò)葉面噴灑1000、500、10
2、0mg/L亞硒酸鈉水溶液,陰性對(duì)照組噴灑等量自來(lái)水,每組噴施6顆,一周后重噴1次,待女貞樹(shù)自然生長(zhǎng)至果熟,于2009年12月采收紫紅色飽滿果實(shí)。經(jīng)加工處理后,采用ICP-MS、FAAS對(duì)富硒女貞子14種礦物元素進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示:女貞葉面噴施亞硒酸鈉濃度為1000mg/L時(shí),容易發(fā)生落花、黃葉現(xiàn)象;噴施濃度為500mg/L、100mg/L時(shí),其果實(shí)硒含量分別達(dá)到了0.93、0.43μg/g,極顯著高于對(duì)照組女貞子中的硒含量0.03μg/
3、g(P<0.01),且其他重金屬鉛、鎘等含量均符合國(guó)家安全標(biāo)準(zhǔn)。
試驗(yàn)二硒對(duì)女貞子營(yíng)養(yǎng)成分及活性成分的影響通過(guò)對(duì)富硒女貞子營(yíng)養(yǎng)成分、礦物元素及其主要活性成分齊墩果酸、熊果酸的含量測(cè)定,來(lái)觀察硒對(duì)女貞子營(yíng)養(yǎng)成分及生物活性成分積累的影響。結(jié)果顯示:葉面噴施硒肥可以提高女貞子中蛋白質(zhì)、熊果酸、氨基酸的含量,改變多種礦物質(zhì)元素的含量比,使硒、鍶、錳等人體必需的微量元素顯著地增加,常量元素鈉含量顯著降低。富硒后女貞子中的齊墩果酸含量
4、低于普通女貞子;而對(duì)熊果酸含量提高具有一定的正相關(guān)性。
試驗(yàn)三富硒女貞子的安全性試驗(yàn)采用最大給藥量的方法,觀察富硒女貞子1日內(nèi)給予小鼠灌胃的急性毒性反應(yīng)。結(jié)果測(cè)得富硒女貞子最大給藥量為80g/kg。然后,分別以5000、2500、1250mg/kg濃度的富硒女貞子大鼠灌胃給藥,連續(xù)給藥90d作亞慢性毒性試驗(yàn)。期間每天觀察大鼠臨床癥狀,并于連續(xù)給藥45d和90d測(cè)定大鼠的血液生理、血清生化指標(biāo)以及心、肝、脾、肺、腎、胃腸等組
5、織器官的變化。試驗(yàn)結(jié)果顯示:各試驗(yàn)組大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)均在正常范圍內(nèi),與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。表明在試驗(yàn)條件下,富硒女貞子無(wú)急性毒性和亞慢性毒性反應(yīng)。
試驗(yàn)四富硒女貞子對(duì)雜交瘤細(xì)胞增殖的影響采用MTT法測(cè)定富硒女貞子水提和醇提取物、女貞子水提和醇提取物對(duì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的安全濃度,并測(cè)定了在安全濃度下12、24、36、48h時(shí)間點(diǎn)各藥物對(duì)雜交瘤細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示:富硒女貞子和女貞子的水提取物、醇提取物分別在200、400μg/
6、mL濃度下對(duì)瘤細(xì)胞沒(méi)有明顯的毒性。富硒女貞子水提物在20~200μg/mL范圍內(nèi)在12h時(shí)各濃度對(duì)雜交瘤細(xì)胞的增殖活性均有促進(jìn)作用,且顯著高于對(duì)照組,亦普遍優(yōu)于女貞子水提物相應(yīng)各濃度的作用效果。富硒女貞子醇提物在20~400μg/mL各濃度作用24、36h對(duì)雜交瘤細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用亦優(yōu)于女貞子醇提物組,表明富硒女貞子水提取物和醇提取物均具有促進(jìn)雜交瘤細(xì)胞增殖而提高特異性免疫的作用,且其效果優(yōu)于女貞子組。
試驗(yàn)五富硒女貞子對(duì)
7、雞抗氧化和免疫功能的影響選取14日齡雛雞108只,隨機(jī)分成3組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)12只雞。分別給予0.4%濃度的富硒女貞子和女貞子水提液混飲;對(duì)照組正常飲水,飼喂基礎(chǔ)日糧。于7、21日齡分別用雞新城疫低毒力活疫苗(LaSota株)滴鼻、點(diǎn)眼免疫,并分別于21、28、35、42日齡測(cè)定雞新城疫抗體效價(jià)和血清中白細(xì)胞介素-2水平;42日齡測(cè)定免疫器官指數(shù)與血漿和組織中GSH-Px、SOD和MDA的含量。結(jié)果顯示:富硒女貞子可顯著提高雞
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