GDNF和E2協(xié)同保護(hù)受損DA能神經(jīng)細(xì)胞機(jī)制的研究.pdf

1、目的：有證據(jù)表明，膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)與17β-雌二醇(E2)對(duì)DA能神經(jīng)細(xì)胞具有協(xié)同保護(hù)的作用，這種協(xié)同保護(hù)作用是通過激活胞內(nèi)PI3-K/Akt信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的，而且神經(jīng)型鈣粘蛋白(N-cadherin)是介導(dǎo)激活該信號(hào)通路的跨膜蛋白，但是在這個(gè)過程中N-cadherin如何參與并發(fā)揮其功能的尚不清楚。鑒于GDNF能夠促使N-cadherin的Tyr-860位點(diǎn)磷酸化，所以我們提出：GDNF和E2協(xié)同保護(hù)受損DA能神經(jīng)

2、細(xì)胞的機(jī)制與N-cadherin的Tyr-860位點(diǎn)磷酸化有關(guān)。本研究的目的即是驗(yàn)證之。
　　方法：本研究以體外培養(yǎng)的6-羥基多巴胺(6-OHDA)損傷后的MN9D細(xì)胞為研究對(duì)象，分別用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染基因干擾N-cadherin質(zhì)粒、過表達(dá)N-cadherin質(zhì)粒、N-cadherin Tyr-860位點(diǎn)點(diǎn)突變質(zhì)粒，以及pcDNA3.1空載體質(zhì)粒和psilencer1，0-U6空載體質(zhì)粒，另設(shè)脂質(zhì)體對(duì)照組和空白對(duì)照組。然后在GDNF和

3、E2共同作用下，利用免疫印跡檢測(cè)和免疫細(xì)胞化學(xué)等方法，以MN9D細(xì)胞內(nèi)N-cadherin和Akt的磷酸化水平為指標(biāo)，鑒定N-cadherinTyr-860位點(diǎn)的作用。隨后通過免疫共沉淀、免疫印跡檢測(cè)和免疫細(xì)胞化學(xué)等方法，對(duì)比轉(zhuǎn)染這些質(zhì)粒后細(xì)胞中胞漿內(nèi)與胞膜上雌激素α受體(ERα)與N-cadherin的結(jié)合量。
　　結(jié)果：在GDNF與E2共同作用下，Ser473位點(diǎn)磷酸化的Akt量隨著Tyr-860位點(diǎn)的磷酸化的N-cadher

4、in量的改變而改變，另外ERα與N-Cadherin的結(jié)合量發(fā)生了改變，兩者在膜上的結(jié)合量增加，同時(shí)胞漿中的減少，但點(diǎn)突變N-cadherin(Tyr-860)組中，ERα與N-cadherin在胞膜上的結(jié)合量并沒有明顯增加，這種協(xié)同保護(hù)作用受到了抑制；在無GDNF與E2作用時(shí)，ERα與N-cadherin分別在胞漿胞膜中的結(jié)合量隨著p-N-cadherin(Tyr-860)量的改變而發(fā)生變化，過表達(dá)組N-cadherin中ERα與N-