間充質(zhì)干細(xì)胞及SDF-1-CXCR4在哮喘大鼠氣道炎癥及氣道重塑中的作用.pdf

1、目的:(1)通過(guò)比較慢性哮喘大鼠和正常大鼠的外周血中間充質(zhì)干細(xì)胞含量的差異，初步判斷間充質(zhì)干細(xì)胞與哮喘致病過(guò)程之間是否可能存在聯(lián)系。(2)通過(guò)觀察哮喘大鼠肺組織、氣道壁SDF-1、CXCR4表達(dá)的變化，研究SDF-1、CXCR4是否參與哮喘大鼠氣道炎癥和氣道重塑過(guò)程。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)研究，為后期靜脈注射移植間充質(zhì)干細(xì)胞，研究其在慢性哮喘氣道炎癥及氣道重塑中的作用及SDF-1/CXCR4信號(hào)軸對(duì)其的影響打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:(1)將

2、18只SPF級(jí)SD雌性大鼠隨機(jī)分為:正常對(duì)照組、哮喘4周組和哮喘8周組，每組6只。卵清蛋白(OVA)致敏后，霧化吸入OVA制作哮喘模型。哮喘模型成功后，測(cè)定氣道壓力;通過(guò)HE染色、Image-ProPlus圖像分析軟件分析大鼠支氣管壁的嗜酸性粒細(xì)胞(ESO)浸潤(rùn)情況、測(cè)定支氣管管腔的內(nèi)周長(zhǎng)、管壁面積、支氣管平滑肌面積、平滑肌細(xì)胞核數(shù);采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組間充質(zhì)干細(xì)胞的含量，并分析其與哮喘氣道炎癥

3、及氣道重塑的關(guān)系;(2)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測(cè)各組大鼠肺組織SDF-1、CXCR4的表達(dá)變化;用免疫組織化學(xué)染色法(IHC)檢測(cè)各組大鼠氣道壁SDF-1表達(dá)的變化;統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并分析SDF-1、CXCR4與哮喘氣道重塑及氣道炎癥的關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)哮喘4周組、哮喘8周組大鼠的氣道反應(yīng)性、氣道壁EOS計(jì)數(shù)、支氣管管壁面積、支氣管平滑肌面積、平滑肌細(xì)胞核數(shù)目、外周血中間充

4、質(zhì)干細(xì)胞比例均較正常對(duì)照組顯著增加(P＜0.01或P＜0.05);哮喘兩組間上述指標(biāo)差異顯著(P＜0.01);Pearson線性相關(guān)顯示:各組大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中間充質(zhì)干細(xì)胞的含量與氣道反應(yīng)性、EOS浸潤(rùn)數(shù)、支氣管壁面積、支氣管平滑肌厚度及支氣管平滑肌細(xì)胞核數(shù)均呈正相關(guān)（均P＜0.001）。(2)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示哮喘4周組、哮喘8周組大鼠肺組織SDF-1、CXCR4的表達(dá)與正常對(duì)照組相比均顯著增強(qiáng)，哮喘8周組的SDF-1及CX

5、CR4的表達(dá)較哮喘4周組亦明顯增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）;Western blotting檢測(cè)結(jié)果同RT-PCR結(jié)果基本一致;免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示哮喘4周組、哮喘8周組大鼠氣道壁SDF-1的表達(dá)較正常對(duì)照組顯著增加，哮喘8周組的SDF-1的表達(dá)量亦高于哮喘4周組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）;Pearson線性相關(guān)顯示:各組大鼠肺組織、氣道壁SDF-1、CXCR4mRNA及蛋白的表達(dá)與氣道反應(yīng)性、EOS浸潤(rùn)數(shù)