多西環(huán)素對哮喘大鼠氣道炎癥及氣道重塑的影響.pdf

1、目的:
　　 本實驗通過建立哮喘大鼠模型，以血清IL-5、IL-13、TNF-α為氣道炎性指標，以α-SMA為氣道重塑指標，以此來觀察多西環(huán)素干預治療后MMP-9、IL-5、IL-13、TNF-α、α-SMA的變化，從而探討多西環(huán)素對哮喘大鼠氣道炎癥及重塑的預防作用及可能機制，為臨床哮喘的防治提供新的途徑。
　　 方法:
　　 健康清潔SD雄性大鼠33只，6周齡，體重50-100g之間，隨機分為正常對照組、哮喘模

2、型組、多西環(huán)素干預組，每組11只。哮喘模型組、多西環(huán)素干預組分別于實驗第1、8天對所有大鼠腹腔注射OVA100mg和氫氧化鋁100mg（混于0.9％生理鹽水2ml中）進行致敏，第15天起將大鼠置于自制的非完全密閉霧化吸入箱內(nèi)，給予OVA5ml霧化吸入30min進行激發(fā)，隔日1次，共激發(fā)20次，其中多西環(huán)素干預組在每次OVA激發(fā)前30min按30mg/kg采用口腔灌服的方式給大鼠用藥。正常對照組的致敏和激發(fā)均以生理鹽水代替OVA進行，余同

3、哮喘組。
　　 最后一次激發(fā)24小時后，所有大鼠用1％戊巴比妥鈉麻醉，收集肺泡灌洗液、血清及肺組織。計數(shù)肺泡灌洗液中的細胞數(shù)并進行分類;ELISA法檢測血清中的IL-5、IL-13的濃度，放免法檢測血清中TNF-α的濃度，免疫組化法檢測肺組織中MMP-9、α-SMA的表達;肺組織行病理切片，HE染色，采用計算機圖像分析技術(shù)測定支氣管基底膜周徑(Pbm)、總管壁面積(WAt)、平滑肌面積(WAm)等反映氣道壁厚度的指標。
　

4、　 結(jié)果:
　　 1、肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數(shù)及嗜酸性粒細胞計數(shù)(×106/L)的結(jié)果:正常對照組9.42±3.67、1.24±0.72，哮喘組35.53±7.06、4.84±0.65，多西環(huán)素干預組14.66±5.81、2.14±0.58。哮喘組與多西環(huán)素干預組的細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞計數(shù)均明顯高于正常對照組（F=64.840P＜0.05，F(xiàn)=90.598P＜0.05），其中多西環(huán)素干預組上述細胞計數(shù)均明顯低于哮喘組

5、(P＜0.05)。
　　 2、病理結(jié)果:哮喘組大鼠的肺組織病理切片可見大量炎性細胞浸潤，氣道管壁、基底膜及血管壁增厚，血管及平滑肌增生。多西環(huán)素干預組的炎性細胞的浸潤程度，氣道管壁、基底膜及血管壁的增厚程度，血管及平滑肌的增生程度均較哮喘組減輕。
　　 3、圖像分析支氣管管壁厚度、平滑肌層厚度（μm2/μm）分別為:正常對照組65.47±7.22、20.09±6.09，哮喘組109.95±13.85、56.94±8.23

6、，多西環(huán)素干預組86.37±5.85、40.64±4.53。哮喘組與多西環(huán)素干預組支氣管壁厚度、平滑肌厚度均明顯高于正常對照組（F=58.737P＜0.05，F(xiàn)=89.782P＜0.050），其中多西環(huán)素干預組上述厚度均低于哮喘組(P＜0.05)。
　　 4、ELISA法檢測血清IL-5、IL-13的濃度（pg/ml）:
　　 血清IL-5濃度:正常對照組（15.92±3.66），哮喘組（38.63±6.64），多西環(huán)素

7、干預組（20.42±4.50）。哮喘組和多西環(huán)素干預組血清IL-5的濃度均高于正常對照組（F=61.348，P＜0.05），其中多西環(huán)素干預組低于哮喘組（P＜0.05）。
　　 血清IL-13濃度:正常對照組（16.98±7.53），哮喘組（57.58±14.09），多西環(huán)素干預組（35.75±8.91）。哮喘組和多西環(huán)素干預組血清IL-13的濃度均明顯高于正常對照組（F=40.713，P＜0.05），其中多西環(huán)素干預組低于哮喘

8、組(P＜0.05)。
　　 5、放免法檢測血清TNF-α的濃度(ng/ml):正常對照組（0.43±0.25），哮喘組（1.57±0.20），多西環(huán)素干預組（1.20±0.24）。哮喘組和多西環(huán)素干預組血清TNF-α的濃度均明顯高于正常對照組(F=68.254，P＜0.05)，其中多西環(huán)素干預組低于哮喘組(P＜0.05)。
　　 6、免疫組化法檢測肺組織MMP-9、α-SMA的表達:
　　 MMP-9的平均光度值

9、:正常對照組（0.24±0.06），哮喘組（0.52±0.06），多西環(huán)素干預組（0.39±0.06）。哮喘組和多西環(huán)素干預組肺組織MMP-9的表達均高于正常對照組(F=57.966，P＜0.05);其中多西環(huán)素干預組低于哮喘組(P＜0.05)。
　　 α-SMA的平均光度值:正常組對照組（0.20±0.04），哮喘組（0.55±0.06），多西環(huán)素干預組(0.35±0.06)。哮喘組、多西環(huán)素干預組肺組織α-SMA的表達均高于

10、正常對照組(F=112.663，P＜0.05);其中多西環(huán)素干預組低于哮喘組(P＜0.05)。
　　 7、直線相關(guān)性分析結(jié)果:血清IL-5、IL-13的濃度與BALF中嗜酸性粒細胞計數(shù)呈正相關(guān)(r=0.817，P＜0.05;r=0.739，P＜0.05)，血清TNF-α的濃度與BALF中細胞總數(shù)呈正相關(guān)(r=0.807，P＜0.05)，肺組織MMP-9的表達與BALF中細胞總數(shù)呈正相關(guān)(r=0.738，P＜0.05)，肺組織MM

11、P-9的表達與血清TNF-α濃度呈正相關(guān)(r=0.793，P＜0.05)，肺組織α-SMA的表達與平滑肌層厚度呈正相關(guān)（r=0.841，P＜0.05），肺組織MMP-9的表達與支氣管壁厚度、平滑肌層厚度、肺組織α-SMA的表達呈正相關(guān)(r=0.819,P＜0.05;r=0.883,P＜0.05;r=0.841,P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、本實驗通過抗原致敏和反復霧化激發(fā)，成功建立了以氣道炎癥和氣道重塑為特征

12、的哮喘大鼠模型。
　　 2、哮喘組大鼠的肺組織病理可見大量炎性細胞浸潤，肺泡灌洗液中的細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞計數(shù)均明顯高于正常對照組，血清IL-5、IL-13、TNF-α的濃度也明顯高于正常對照組。多西環(huán)素干預組大鼠的肺組織病理中炎性細胞的浸潤程度，肺泡灌洗液中細胞總數(shù)和嗜酸性粒細胞計數(shù)以及血清IL-5、IL-13、TNF-α的濃度均低于哮喘組。且血清IL-5、IL-13的濃度與BALF中嗜酸性粒細胞計數(shù)呈正相關(guān)，血清TNF-α

13、的濃度與BALF中細胞總數(shù)呈正相關(guān)，提示多西環(huán)素可以影響炎癥介質(zhì)的生成從而減輕哮喘的氣道炎癥。
　　 3、哮喘組大鼠肺組織MMP-9的表達較正常對照組明顯升高，多西環(huán)素干預組肺組織MMP-9的表達較哮喘組減少，且肺組織MMP-9的表達與BALF中炎性細胞總數(shù)及血清TNF-α的濃度呈正相關(guān)，提示MMP-9可以影響氣道炎癥，多西環(huán)素可以通過抑制MMP-9的活性減輕哮喘的氣道炎癥。
　　 4、哮喘組大鼠的支氣管管壁厚度、平滑肌