4-羥基喹啉-3-羧酰胺類似物的免疫活性篩選及H1521對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎炎的治療作用及機(jī)理研究.pdf

1、Linomide(roquinimex，LS2616)是由瑞典AB LEO制藥公司開發(fā)一種Th1/Th2平衡調(diào)節(jié)劑，對(duì)多種自身免疫病的動(dòng)物模型均有較好的治療作用。Linomide在美國(guó)作為治療多發(fā)性硬化癥的在研新藥(investigational new drug，IND)曾進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn)，但由于發(fā)現(xiàn)較為嚴(yán)重的心臟毒性被提前終止。但是，多家實(shí)驗(yàn)室仍在對(duì)linomide進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造以期發(fā)現(xiàn)高效低毒的新型免疫調(diào)節(jié)劑。本實(shí)驗(yàn)室亦與化學(xué)合成實(shí)

2、驗(yàn)室合作，由惲榴紅研究員領(lǐng)導(dǎo)的研究小組負(fù)責(zé)linomide的結(jié)構(gòu)改造、樣品合成，得到一系列4-羥基喹啉-3-羧酰胺類似物，并對(duì)所獲得化合物進(jìn)行免疫活性篩選和評(píng)價(jià)。 一、4-羥基喹啉-3-羧酰胺類似物的活性篩選 針對(duì)linomide的作用特點(diǎn)，并考慮到其毒性因素，首先采用小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)在體外對(duì)linomide類似物進(jìn)行免疫活性初篩。Linomide類似物共計(jì)接入124個(gè)，由于溶解度的原因，共對(duì)其中86個(gè)化合物進(jìn)行了免

3、疫活性初篩。結(jié)果表明，86個(gè)化合物中有38個(gè)作用與linomide相似，體外應(yīng)用具有免疫抑制活性。進(jìn)而，采用MTT法對(duì)上述38個(gè)化合物對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的毒性作用進(jìn)行了初篩。結(jié)果表明，H1521、H0418、H0215、H1619、H0216、H1921、H0715等七個(gè)化合物在1～100μg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用或毒性低于linomide o在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步觀察了H1521等七個(gè)化合物對(duì)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)(de

4、layed typehypersensitivity，DTH)的影響。結(jié)果表明，化合物H1521和H0418的作用與linomide相似，明顯增強(qiáng)小鼠DTH；化合物H0215、H0216、H1619和H0715對(duì)小鼠DTH則無(wú)明顯影響。同時(shí)，檢測(cè)了小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清Th1/Th2細(xì)胞因子的水平，結(jié)果表明，H1521和H0418能顯著增加Th1細(xì)胞因子IFN-γ分泌，對(duì)Th2細(xì)胞因子IL-4分泌無(wú)明顯影響，提示H1521和H0418能調(diào)節(jié)

5、Th1/Th2平衡，具有較好的開發(fā)前景。因此，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，我們選擇化合物H1521，對(duì)其抗自身免疫性腎炎的活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行了初步探討。 二、H1521對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎炎的療效評(píng)價(jià) 本研究選用的小鼠自身免疫性腎炎模型是一種慢性移植物抗宿主病(chronicgraft-versus-host disease，cGVHD)病理模型，該模型具有與人類SLE相似的病理生理學(xué)變化和臨床表現(xiàn)，如Th1/T

6、h2細(xì)胞失衡，B細(xì)胞異?；罨a(chǎn)生自身抗體，免疫復(fù)合物沉積介導(dǎo)血管球性腎炎，因此常被用于自身免疫性腎炎發(fā)病機(jī)理、防治藥物及藥物作用機(jī)理的研究。 三、H1521對(duì)自身免疫性腎炎小鼠治療作用的機(jī)理研究 在確定H1521對(duì)小鼠自身免疫性腎炎療效的基礎(chǔ)上，針對(duì)腎炎發(fā)生發(fā)展的主要病理生理學(xué)環(huán)節(jié)及關(guān)鍵分子，觀察了H1521對(duì)Th1/Th2細(xì)胞平衡、B細(xì)胞活化、巨噬細(xì)胞活化、性激素水平等方面的影響，旨在探討H1521防治自身免疫性。腎炎