EGCG對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響.pdf

1、體外胚胎生產(chǎn)中，各種抗氧化劑常被添加于不同的培養(yǎng)液中以提高體外胚胎生產(chǎn)效率。實(shí)驗(yàn)表明，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EpigallocatechinGallate，EGCG，"表沒(méi)食子兒茶素"Epigallocatechin)能夠清除健康細(xì)胞中ROS，提高配子的抗氧化能力，有利于動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟和精子受精。本研究主要探討了EGCG對(duì)水牛卵子體外成熟、精子受精能力的影響以及可能的作用機(jī)理，旨在使水牛體外胚胎生產(chǎn)高效化。本研究包括三個(gè)試驗(yàn):

2、
　　試驗(yàn)一，EGCG對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟的影響。旨在探討EGCG對(duì)水牛卵母細(xì)胞卵丘擴(kuò)展、成熟率的影響，并初步試驗(yàn)EGCG對(duì)水牛配子發(fā)育潛能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)10、20μmol/L處理組與對(duì)照組卵丘擴(kuò)展指數(shù)差異顯著(2.49、2.42 vs.2.22，P＜0.05);5、30μmol/L處理組卵丘擴(kuò)展指數(shù)也高于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.36、2.28 vs.2.22，P＞0.05);(2)10、20μmol/L處理組成熟

3、率顯著高于對(duì)照組(59.31％、50.98％ vs.45.26％，P＜0.05);但兩組之間差異不顯著;5μmol/L和30μmol/L處理組的成熟率與對(duì)照組差異不顯著(47.04％、42.81％ vs.45.26％，P＞0.05);(3)在成熟液中添加EGCG，各處理組的卵裂率、囊胚率均高于對(duì)照組，其中10μmol/L處理組效果最佳。孤雌激活后，卵裂率和囊胚率均顯著高于對(duì)照組(67.07％vs.57.53％、31.69％ vs.20.

4、66％，p＜0.05);體外受精后，卵裂率和囊胚率也顯著高于對(duì)照組(59.64％ vs.44.65％、24.68％ vs.15.02％，p＜0.05)。以上結(jié)果表明，EGCG能促進(jìn)水牛卵母細(xì)胞體外成熟，并提高了卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能。
　　試驗(yàn)二，EGCG（0、5、10、20、30μmol/L）對(duì)水牛卵母細(xì)胞體外成熟階段抗氧化能力的影響。結(jié)果顯示:(1)添加20、30μmol/L的處理組MⅡ期ROS DCF熒光強(qiáng)度與對(duì)照組差異顯著(1

5、8.77、25.39 vs.38.04,P＜0.05);(2)各處理組MⅡ期水牛卵母細(xì)胞H2O2含量與對(duì)照組差異不顯著(4.68、4.33、4.16、4.51 vs.4.90,P＞0.05);(3)5、10、20μmol/L處理組GSH含量與對(duì)照組差異顯著(3.0、3.21、3.25 vs.2.59，P＜0.05);30μmol/L處理組GSH含量也高于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.99 vs.2.59，P＞0.05)。以上結(jié)果表明:在水

6、牛卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中，EGCG能夠降低卵母細(xì)胞內(nèi)活性氧水平，提高GSH的合成，但不能降低H2O2的含量;(4)綜上所述，在卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中，EGCG影響氧化反應(yīng)。
　　試驗(yàn)三，探討在受精液中添加10μmol/L的EGCG對(duì)水牛精子受精能力的影響以及在成熟液和受精液中同時(shí)添加EGCG是否有協(xié)同作用。結(jié)果顯示:在成熟液、受精液、成熟液和受精液中分別添加10μmol/L的EGCG后，各組卵裂率顯著高于對(duì)照組(61.31％、59

7、.14％、58.57％ vs.45.71％，P＜0.05);各組的囊胚率顯著高于對(duì)照組(23.61％％、22.77％、23.56％ vs.16.74％，P＜0.05)。以上結(jié)果表明，EGCG能提高水牛精子受精能力和促進(jìn)早期胚胎發(fā)育，但在成熟液和受精液中同時(shí)添加EGCG沒(méi)有協(xié)同作用。為了高效方便，本試驗(yàn)中，最佳方案為在成熟液或者受精液中添加10μmol/L的EGCG。
　　總之，EGCG作為一種高效的抗氧化劑，能夠促進(jìn)水牛卵母細(xì)胞體