人臍帶血間充質(zhì)干細胞復(fù)合β-磷酸三鈣的骨組織工程學(xué)實驗研究.pdf

1、目的：采用兩種改良方法體外分離培養(yǎng)人臍帶血間充質(zhì)干細胞(hUCB-MSCs)，對其進行生物學(xué)鑒定，觀察其與支架材料β-磷酸三鈣(β-TCP)的生物相容性，并探討人臍帶血血清(hCS)對其體外培養(yǎng)擴增的支持作用。 方法：取28份足月產(chǎn)新生兒臍帶血，以密度梯度離心法分離單個核細胞，接種于含體積分?jǐn)?shù)0.1胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)基中，待細胞貼壁之后按兩種改良方法進行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察hUCB-MSCs的形態(tài)；流式細胞儀測定細胞免疫表型

2、；進行成骨、成脂及成軟骨誘導(dǎo)并染色；將hUCB-MSCs與β-TCP復(fù)合，掃描電鏡下觀察其在材料表面及內(nèi)部的生長情況；將hUCB-MSCs置入含體積分?jǐn)?shù)0.1hCS的α-MEM培養(yǎng)體系中，觀察其生長增殖情況及分化能力。 結(jié)果：28份臍帶血中13份獲得可穩(wěn)定傳代的成纖維樣細胞(Ⅰ組，4/10；Ⅱ組，9/18)；該細胞可表達間充質(zhì)干細胞表面抗原CD105、CD29，在特定條件下可向成骨細胞、脂肪細胞及軟骨細胞轉(zhuǎn)化；該細胞與β-TCP

3、復(fù)合后在其表面及內(nèi)部生長、增殖良好；hUCB-MSCs可在含hCS的培養(yǎng)液內(nèi)正常生長，傳代5代無明顯形態(tài)改變并在含特定誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基中可向成骨細胞、脂肪細胞分化。 結(jié)論：臍帶血中存在MSCs，培養(yǎng)方法經(jīng)改良后可提高hUCB-MSCs的培養(yǎng)成功率。hUCB-MSCs具有多向分化潛能，在特定誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)下，可分化為成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞。hUCB-MSCs和β-TCP生物相容性良好。初步研究發(fā)現(xiàn)人臍帶血血清對hUCB-MSCs體