人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及向類肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的初步研究.pdf

1、背景:在本研究中，嘗試用簡(jiǎn)便有效的細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)，從人臍帶血中分離MSCs，并加以體外培養(yǎng)擴(kuò)增，用人肝細(xì)胞株(L-02細(xì)胞株)的培養(yǎng)上清液體外誘導(dǎo)UCBMSCs向類肝細(xì)胞分化，期望在成體干細(xì)胞橫向分化中做一些基礎(chǔ)研究工作，并嘗試為臨床肝病的細(xì)胞移植療法等提供一種新的思路。 目的: 1.建立人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞簡(jiǎn)便有效的分離方法，并體外傳代培養(yǎng)擴(kuò)增以獲得大量的人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞； 2.觀察人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)

2、胞生物學(xué)特性和細(xì)胞表型； 3.人肝細(xì)胞株L-02細(xì)胞的培養(yǎng)上清液體外誘導(dǎo)UCBMSCs向類肝細(xì)胞分化，并檢測(cè)分化細(xì)胞的生物學(xué)特征和細(xì)胞表型。 方法1.采用密度梯度離心法結(jié)合直接貼壁法分離UBCMSCs，DMEM(低糖)培養(yǎng)基加20％新生小牛血清原代及傳代培養(yǎng)，進(jìn)行形態(tài)觀察，繪制原代生長(zhǎng)曲線圖，應(yīng)用FACScan流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原表達(dá)情況，并用免疫組化的方法檢測(cè)細(xì)胞ALB和CK18的表達(dá)情況； 2.以體外傳

3、代培養(yǎng)的第3代細(xì)胞為研究對(duì)象，用人肝細(xì)胞株L-02的培養(yǎng)上清液進(jìn)行誘導(dǎo)分化； 3.以未誘導(dǎo)的UCBMSCs和L-02細(xì)胞為對(duì)照，對(duì)誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)觀察，用免疫組化的方法檢測(cè)細(xì)胞ALB和CK18的表達(dá)情況，并應(yīng)用FACScan流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原表達(dá)情況。 結(jié)論: 1.密度梯度離心法結(jié)合直接貼壁法可在體外分離培養(yǎng)UBCMSCs，并可通過(guò)傳代培養(yǎng)大大提高M(jìn)SCs純度，并具有良好的增殖能力；同時(shí)臍帶血來(lái)源廣