高血壓患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌BK-,Ca-電流及其對(duì)NO敏感性變化的研究.pdf

1、目的：高血壓是危害人類健康的常見病，主要表現(xiàn)為小動(dòng)脈張力增加，不能對(duì)抗增高的血管緊張度及對(duì)血管活性物質(zhì)做出正常反應(yīng)。腸系膜動(dòng)脈作為人體主要的內(nèi)臟血管，在全身的動(dòng)脈中所占比例最大，是形成外周阻力的主要血管，對(duì)循環(huán)中的活性物質(zhì)敏感，對(duì)血壓的調(diào)節(jié)具有重要意義。大電導(dǎo)鈣激活鉀通道（large—conductance calcium—activated potassium channels，BKCa）是血管平滑肌上主要的負(fù)反饋調(diào)節(jié)器，在血管的舒張

2、調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。一氧化氮（nitric oxide，NO）是體內(nèi)調(diào)節(jié)血管張力的重要?dú)怏w分子，通過激活BKCa發(fā)揮其調(diào)節(jié)作用。高血壓狀態(tài)下，BKCa介導(dǎo)的電流及BKCa對(duì)NO的敏感性是否有變化，其機(jī)制不完全清楚，深入討論這些問題對(duì)揭示高血壓發(fā)生的病理生理機(jī)制有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過運(yùn)用血管環(huán)和全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察高血壓患者腸系膜動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）BKCa電流及BK

3、Ca對(duì)NO的敏感性變化，為探討高血壓的發(fā)生機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法：（1）膜片鉗實(shí)驗(yàn)：將分離好的腸系膜動(dòng)脈，縱向剖開剪成2 mm×5 mm的組織條塊，置于酶液中進(jìn)行兩步消化。選取具有較強(qiáng)立體感，表面光滑的平滑肌細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，采用全細(xì)胞穿孔膜片鉗技術(shù)記錄電流。電流信號(hào)經(jīng)膜片鉗放大器（Axopatch200B）放大，濾波處理后輸入計(jì)算機(jī)，經(jīng)Clampex10.1軟件采集電流，Clampfit10.1、MiniAnalysis6.0軟件系

4、統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。觀察并比較高血壓組（hypertension group，HT）和血壓正常組（normotension group，NT）BKCa宏觀電流及自發(fā)瞬時(shí)外向電流（spontaneous transient outward currents，STOCs）。（2）血管環(huán)實(shí)驗(yàn)：迅速分離腸系膜動(dòng)脈置于溶液Ⅰ中，將游離血管剪成長約0.3～0.4 cm的血管環(huán)，用兩根銀絲穿過動(dòng)脈環(huán)并形成三角環(huán)狀，固定在含95%O2和5%CO2，37℃的

5、浴槽中。血管環(huán)經(jīng)過張力換能器（TRI201）、生物放大器（ML135）與生理記錄儀（Powerlab/8sp）相連，采用Chart軟件采集數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析。觀察NO對(duì)HT和NT腸系膜動(dòng)脈血管環(huán)張力的影響。實(shí)驗(yàn)采用硝普鈉（sodium nitroprusside，SNP）作為NO的供體，KC1檢驗(yàn)血管環(huán)活性并引起一定收縮，乙酰膽堿（acetycholine，Ach）驗(yàn)證血管環(huán)內(nèi)皮是否受損。 結(jié)果：（1）急性酶分離的腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)

6、胞BKc。電流的基本特性：①BKca宏觀電流具有明顯的電壓依賴性及外向整流的性質(zhì)；STOCs的幅度和頻率具有明顯的電壓依賴性，可以隨機(jī)性的疊加在全細(xì)胞BKca電流上（n=10）。②BKCa的特異性阻斷劑Iberiotoxin（IbTX）（100 nM）可阻斷BKca宏觀電流及STOCs（n=5）.（2）比較HT與NT BKCa宏觀電流及STOCs：①HT（n=10）與NT（n=10）BKCa電流密度分別為10.6558±2.2337 p

7、A/pF（+60mV）、11.0727±2.4688 pA/pF（+60mV），兩組間無明顯差異（p>0.05）。②HT（n=10）STOCs（—20mV）幅值及頻率為27.9314±3.2642 pA、1.5226±0.2839 Hz，NT（n=10）STOCs（—20mV）幅值及頻率為61.2568±2.7463 pA、2.2698±0.4652 Hz，HT STOCs幅值和頻率比NT低（p<0.05）。（3）NO對(duì)HT和NT腸系膜

8、動(dòng)脈血管環(huán)張力的影響：①KCl（60 mM）分別增加HT（n=10）和NT（n=10）的張力273.38±38.13%，358.27±31.29%，兩組間無差異（p>0.05）。②NO降低人腸系膜血管環(huán)張力，IbTX（100 nM）可抑制NO引起的張力降低（n=5）。⑨NO引起HT（n=10）和NT（n=10）血管舒張分別為14.81±3.03%，31.97±5.86%，HT舒張的程度比NT低（p<0.05）。 結(jié)論：（1）急性