高血壓患者腸系膜動脈平滑肌AngⅡ受體mRNA表達變化的研究.pdf

1、目的：高血壓（hypertension，HT）是危害人類健康的心血管常見病、多發(fā)病，也是一系列心腦血管疾?。ㄈ缰酗L、冠心病、糖尿?。┑闹饕ｋU因素。深入理解高血壓發(fā)生、發(fā)展中的分子機制，對于預防、治療高血壓有重要意義。高血壓主要表現為動脈血管張力增加，阻力動脈的張力持續(xù)增加是高血壓的基本病理特征，而血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）離子通道的活動是血管張力調節(jié)的主要因素，在高血壓中的變化值

2、得探討。研究發(fā)現，大電導鈣激活鉀通道（large conduction calcium—activated potassium channels，BKCa）是血管平滑肌分布最豐富、單通道電導最大（100～300pS）的鉀離子通道，在血管張力調節(jié)中起負反饋調節(jié)作用，它的功能或密度的改變可能是高血壓的發(fā)病機制之一。AngⅡ（angiotensinⅡ）作為一種內源性的縮血管活性物質，通過血管緊張素1型受體（angiotensin recept

3、or1，AT1R）發(fā)揮其縮血管的作用。然而，近年來的研究發(fā)現，AngⅡ還可以作用于血管緊張素2型受體（angiotensin receptor2，AT2R）舒張?zhí)囟ǖ难?，其舒張血管的機制正是通過激活BKCa發(fā)揮作用的，因此，探討高血壓發(fā)病的離子通道機制中AT1R和AT2R的變化以及由此引起的BKca的變化是需要研究的。本課題采用實時熒光定量PCR技術對正常血壓和高血壓患者腸系膜動脈平滑肌AngⅡ受體基因表達進行對比研究，為進一步探討原

4、發(fā)性高血壓發(fā)生發(fā)展過程中可能的離子通道功能變化，為高血壓發(fā)病機制的闡明提供更多的實驗依據。 方法：①24例接受腹部手術的患者分為兩組：原發(fā)性高血壓（HT組）15例（其中未服抗高血壓藥的3例，服抗高血壓藥的12例）、正常血壓（NT組）9例，取其切除的腸系膜動脈作為研究對象；②提取腸系膜動脈總RNA，通過逆轉錄聚合酶鏈反應（RT—PCR）構建標準品和標準曲線；③以GAPDH為內參照基因，采用SYBR GreenⅠ法實時熒光定量PCR

5、技術檢測高血壓患者和正常血壓患者腸系膜動脈平滑肌AngⅡ受體基因mRNA水平； 結果：①總RNA質量：提取的總RNA通過紫外分光光度儀測量，A260/A280在1．80—2．10之間，A260/A230在1．90—2．20之間，濃度大于100ng/ul，通過1%瓊脂糖凝膠電泳得出，28S帶和18S帶明顯，灰度比大于1，5S帶不明顯，無拖尾；②標準曲線和熔解曲線：標準曲線線性關系良好，相關系數R2>0．99，AT1R基因的標準曲線

6、為y=—0．29x+9．22，R2=0．995； AT2R基因的標準曲線為y=—0．30x+7．76，R2=0．997； GAPDH基因的標準曲線為y=—0．27x+5．45，R2=0．996。熔解曲線呈明顯單峰狀，退火溫度與預測值基本一致；③AT1R基因NT組mRNA表達的Ct值為4．1727±0．6084，HT未服藥組及服藥組的mRNA表達的Ct值分別為4．4513±0．5676，4．8074±0．8598，AT1R的mRNA原始拷

7、貝數在NT組和HT組的差異無統計學意義。AT2R基因在NT組mRNA表達的Ct值為7．686±0．6195，HT未服藥組及服藥組的mRNA表達的Ct值分別為9．104±0．4240，7．6203±0．5548，AT2R的mRNA原始拷貝數在HT未服藥組為NT組的0．3926倍，服藥組為NT組的1．0567倍，AT2R在NT組和HT未服藥組的差異有統計學意義（P<0．05）；在NT組和HT服藥組的差異無統計學意義。 結論：與正常組