RAS抑制劑對(duì)鹽敏感性高血壓大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase及P38MAPK影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文分析了RAS抑制劑對(duì)鹽敏感性高血壓大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase及P38MAPK的影響。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：RAS抑制劑調(diào)節(jié)鹽敏感性高血壓大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性及基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究。
　　目的：探討RAS抑制劑對(duì)鹽敏感性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase的活性和基因表達(dá)的

2、影響。
　　方法：選取18只新生雄性Wistar大鼠第1、2天分別注射辣椒辣素(50 mg/kg)，哺乳期后給予高鹽（4％NaCl）飲食一個(gè)月建立感覺(jué)神經(jīng)損傷性鹽敏感性高血壓大鼠模型，隨機(jī)分成三組，每組6只，藥物干預(yù)并觀察鼠尾動(dòng)脈收縮壓變化：替米沙坦組（10mg·kg-1·d–1）、雷米普利組（1 mg·kg-1·d–1）、模型組，另設(shè)一組空白對(duì)照組（n=6）。干預(yù)四周后，各組取胸主動(dòng)脈進(jìn)行平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)，收集第4到6代細(xì)胞采用生

3、化酶學(xué)方法測(cè)定鈉泵（Na+/K+-ATPase）、鈣泵（Ca2+-ATPase）活性。RT-PCR檢測(cè)鹽敏感性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞膜鈉泵α1亞單位（Na+/K+-ATPaseα1-subunit）、鈣泵1型亞單位（plasma membrane calcium ATPase isoform1，PMCA1）mRNA的表達(dá), Western-blot檢測(cè)Na+-K+-ATPaseα1-subunit、PMCA1蛋白的表達(dá)。
　

4、　結(jié)果：鹽敏感性高血壓模型組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓明顯高于空白對(duì)照組大鼠(P<0.05)，鹽敏感性高血壓大鼠經(jīng)替米沙坦與雷米普利干預(yù)后血壓逐漸降低至正常水平。生化酶學(xué)結(jié)果顯示，模型組大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈉泵、鈣泵活性低于空白組(P<0.05)，雷米普利組與替米沙坦組鈉泵、鈣泵活性高于模型組(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的Na+/K+-ATPaseα1-subunit、PMCA1的mRNA表

5、達(dá)降低(P<0.05)；經(jīng)替米沙坦與雷米普利干預(yù)后Na+/K+-ATPaseα1-subunit、PMCA1的mRNA表達(dá)升高(P<0.05)。Western-Blot結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的Na+/K+-ATPaseα1-subunit蛋白表達(dá)減少(P<0.01)，PMCA1蛋白表達(dá)增加(P<0.01)；經(jīng)替米沙坦與雷米普利干預(yù)Na+/K+-ATPaseα1-subunit蛋白表達(dá)增加(P<0.01)，P

6、MCA1蛋白表達(dá)減少(P<0.01)。
　　結(jié)論：替米沙坦與雷米普利干預(yù)后鹽敏感性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈉泵、鈣泵活性和mRNA的表達(dá)升高，推測(cè)鈉泵、鈣泵活性降低可能是鹽敏感性高血壓的發(fā)病機(jī)制之一。鹽敏感性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Na+/K+-ATPase蛋白表達(dá)降低，而PMCA1表達(dá)增加，替米沙坦與雷米普利可逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象，其機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)鈉鈣離子交換異常引起鈣泵蛋白代償增高有關(guān)。
　　第二部分：RAS抑制劑抑制

7、鹽敏感性高血壓大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p38 MAPK表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：探討RAS抑制劑對(duì)鹽敏感性高血壓大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表達(dá)的影響及其機(jī)制。
　　方法：選取18只新生雄性Wistar大鼠第1、2天分別注射辣椒辣素(50 mg/kg)，哺乳期后給予高鹽（4%NaCl）飲食一個(gè)月建立感覺(jué)神經(jīng)損傷性鹽敏感性高血壓大鼠模型，隨機(jī)分成三組,每組6只，干預(yù)并觀察鼠尾動(dòng)脈收縮壓變化：替米

8、沙坦組（10mg·kg-1·d–1）、雷米普利組（1 mg·kg-1·d–1）、模型組，另設(shè)一組空白對(duì)照組6只。干預(yù)四周后，各組取胸主動(dòng)脈進(jìn)行平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)，收集第4到6代細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)鹽敏感性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞膜p38MAPK、血管緊張素II1型受體（Angiotensin II type1 receptor，AT1R）mRNA的表達(dá), Western-blot檢測(cè)磷酸化p38MAPK（p-p38 MAPK）、AT1

9、R蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：鹽敏感性高血壓模型組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓明顯高于空白對(duì)照組大鼠(P<0.05)，鹽敏感性高血壓大鼠經(jīng)替米沙坦與雷米普利干預(yù)后血壓逐漸降低至正常水平。RT-PCR結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的p38MAPK、AT1R的mRNA表達(dá)升高(P<0.05)；與模型組相比，替米沙坦組與雷米普利組p38MAPK、AT1R的mRNA表達(dá)降低(P<0.05)；Western-Blot結(jié)果顯示，與空白組相比，模

10、型組大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的p-p38MAPK、AT1R蛋白表達(dá)升高(P<0.01)；與模型組相比，替米沙坦組與雷米普利組p-p38MAPK、AT1R蛋白表達(dá)降低(P<0.01)。
　　結(jié)論：⑴經(jīng)辣椒辣素處理過(guò)的Wistar大鼠給予高鹽飲食可成功建立感覺(jué)神經(jīng)損傷型鹽敏感性高血壓大鼠模型；⑵替米沙坦與雷米普利能降低鹽敏感性高血壓大鼠血壓至正常水平；⑶鹽敏感性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p38MAPK、AT1R的mRNA表達(dá)升高，p-