脫細(xì)胞骨骼肌支架與雪旺細(xì)胞構(gòu)建體外人工神經(jīng)模型的研究.pdf

1、目的：研究Waller變性對(duì)雪旺細(xì)胞活性的影響，探索來(lái)源于自體骨骼肌組織的脫細(xì)胞支架和自體激活態(tài)的雪旺細(xì)胞作為種子細(xì)胞的混合培養(yǎng)物作為一種神經(jīng)橋接物的可行性，尋找一種周圍神經(jīng)受損傷后修復(fù)的新方法。 方法：將實(shí)驗(yàn)組SD大鼠左側(cè)坐骨神經(jīng)進(jìn)行結(jié)扎，使其發(fā)生Waller變性，7d后將實(shí)驗(yàn)組與正常對(duì)照組同側(cè)的坐骨神經(jīng)進(jìn)行S-100蛋白免疫組織化學(xué)染色，觀察變性對(duì)坐骨神經(jīng)的影響，計(jì)算雪旺細(xì)胞陽(yáng)性率，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較：雪旺細(xì)胞在周圍神經(jīng)受損修復(fù)

2、過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，已成為學(xué)者們公認(rèn)的人工神經(jīng)的種子細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)將SD大鼠坐骨神經(jīng)來(lái)源的雪旺細(xì)胞在體外培養(yǎng)、擴(kuò)增與純化，對(duì)其行S-100蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定及繪制其生長(zhǎng)曲線；且對(duì)自身股二頭肌分別用3﹪Triton X-100溶液和4﹪Deoxycholate鈉鹽溶液進(jìn)行化學(xué)萃取，制備脫細(xì)胞骨骼肌支架，并經(jīng)HE染色及掃描電子顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，最終將雪旺細(xì)胞與經(jīng)無(wú)菌多聚賴氨酸預(yù)處理的脫細(xì)胞支架進(jìn)行混合培養(yǎng)兩周后，用掃描電子顯微鏡

3、觀察兩者的結(jié)合情況。 結(jié)果：Waller變性后7d，實(shí)驗(yàn)組坐骨神經(jīng)發(fā)生與經(jīng)典Waller變性相符的改變，實(shí)驗(yàn)組的S-100蛋白陽(yáng)性率明顯高于正常對(duì)照組，兩者相比具有顯著性差異(P<0.05)；取材于SD大鼠坐骨神經(jīng)在體外培養(yǎng)所得的雪旺細(xì)胞，S-100蛋白染色呈特征性陽(yáng)性；取材于骨骼肌的脫細(xì)胞支架，觀察具有適合雪旺細(xì)胞生長(zhǎng)的相對(duì)規(guī)則的孔隙；雪旺細(xì)胞與脫細(xì)胞骨骼肌支架混合培養(yǎng)后，細(xì)胞在支架上附著良好，且細(xì)胞首尾相聯(lián)，出現(xiàn)類似BUn