風(fēng)心病合并房顫患者心肌組織microRNA-661表達差異分析及其靶基因預(yù)測研究.pdf

1、目的：研究風(fēng)心病合并房顫患者心肌組織 microRNA-661的表達差異并進行驗證，分析其下游可能調(diào)控與房顫有關(guān)的靶基因，旨在探討房顫發(fā)生機制中miRNAs的作用，為進一步研究奠定基礎(chǔ)，并尋求安全有效治療房顫的藥物提供新靶點。
　　方法：⑴經(jīng)知情同意，采集風(fēng)心病瓣膜置換術(shù)患者右心耳心肌組織約250mg入組研究，分為風(fēng)心病合并房顫組與風(fēng)心病無房顫組共4例；⑵以Affymetrix miRNA芯片對風(fēng)心病合并房顫與風(fēng)心病無房顫患者的心

2、肌組織進行miRNAs表達譜檢測，應(yīng)用RMA數(shù)據(jù)分析，F(xiàn)C法初步篩選出其差異表達miRNAs；⑶采用RT-qPCR的方法對篩選出的有意義的miRNAs（hsa-miRNA-661和hsa-miRNA-4800-3p）進行驗證研究，應(yīng)用2-Ct方法分析兩組心肌組織差異表達的miRNAs；⑷運用生物信息學(xué)軟件預(yù)測miRNAs靶基因、文獻檢索及GO和KEGG的分析，在miRNA水平上探討風(fēng)心病合并房顫發(fā)生與維持的可能分子機制。
　　結(jié)果

3、：①風(fēng)心病合并房顫組與風(fēng)心病無房顫組相比，其心肌組織中22條有差異miRNAs的相對表達量，其中6條miRNAs表達上調(diào)，16條miRNAs表達下調(diào)；②驗證研究結(jié)果表明與風(fēng)心病無房顫組比較，風(fēng)心病有房顫組hsa-miR-661相對表達顯著下調(diào)（P＜0.01）,而hsa-miR-4800-3p相對表達沒有統(tǒng)計學(xué)意義變化（P＝0.757）；③預(yù)測hsa-miR-661共同靶基因44個，42個靶基因尚未見與房顫有關(guān)的NCBI PubMed相關(guān)

4、報道；④經(jīng)GO和KEGG數(shù)據(jù)分析，確定hsa-miR-661靶基因分別參與心肌組織發(fā)育、細(xì)胞增殖、生長調(diào)節(jié)功能，作用于肌節(jié)、肌原纖維、收縮纖維，與附著和連接、轉(zhuǎn)錄因子活性調(diào)控、炎癥關(guān)聯(lián)等生物學(xué)過程，分別集中在Wnt、CYTOSKELETON、ADHERENS、JUNCTION、ENDOCYTOSIS、TGF-β和MAPK等信號通路上，其中以Wnt通路顯著富集指數(shù)最高。
　　結(jié)論：⑴風(fēng)心病合并房顫患者心肌組織miRNA基因表達譜存在

5、多種差異，房顫形成可能是多種miRNA通過其介導(dǎo)的下游靶基因共同調(diào)控的結(jié)果；⑵驗證研究顯示在風(fēng)濕性瓣膜病合并房顫組織中hsa-miR-661顯著下調(diào)，hsa-miR-661的表達量與房顫相關(guān)；⑶預(yù)測獲得hsa-miR-661靶基因44個，其中42個靶基因尚未見與房顫有關(guān)的NCBI PubMed相關(guān)報道；⑷通過生物功能和信號通路分析顯示，hsa-miR-661對AF的調(diào)控顯著體現(xiàn)在細(xì)胞外基質(zhì)合成、代謝及 Wnt信號通路上；⑸hsa-miR