TM4SF9在母胎界面的表達及其在胚胎種植中作用的初步探索.pdf

1、目的：
　　研究四跨膜超家族成員9（TM4SF9）在母-胎界面的表達情況，探索其在胚胎種植中的可能作用，為自然流產(chǎn)及異位妊娠的機制研究提供新的研究結(jié)果和方向。
　　研究對象與方法：
　　1.研究對象：
　?、僮匀涣鳟a(chǎn)組：選取2012年2月-2014年1月就診于廣東省第二人民醫(yī)院婦科、產(chǎn)科、生殖醫(yī)學(xué)科的先兆流產(chǎn)、難免流產(chǎn)或超聲檢查發(fā)現(xiàn)胚胎停育（未見胎心搏動、無胚芽等）的患者共52例（流產(chǎn)組1、流產(chǎn)組2）；以正常早孕

2、和未妊娠育齡期女性為對照；
　?、谳斅压苋焉锝M：為2012年2月-2014年1月因“異位妊娠”在廣東省第二人民醫(yī)院婦科行診斷性刮宮和患側(cè)輸卵管切除術(shù)的患者共40例；以正常早孕、未妊娠育齡期女性及輸卵管絕育術(shù)患者為對照。
　　2.方法：
　　1）無菌條件下，收集患者術(shù)中吸出的絨毛、蛻膜、子宮內(nèi)膜組織，及手術(shù)切除的輸卵管組織，采用免疫組化法檢測組織中TM4SF9的表達部位和水平；
　　2）G顯帶法對自然流產(chǎn)絨毛細胞行

3、核型分析。
　　結(jié)果：
　　第一部分 TM4SF9在自然流產(chǎn)母-胎界面的表達
　　1.絨毛中：
　　1）表達部位：在自然流產(chǎn)、正常早孕絨毛中，TM4SF9均表達于增殖活躍的細胞滋養(yǎng)層細胞和具有侵襲性的絨毛外滋養(yǎng)細胞的胞質(zhì)和胞膜中，而合體滋養(yǎng)層細胞則未見表達。
　　2）表達水平：
　?、?TM4SF9在染色體正常流產(chǎn)絨毛中的表達水平
　　TM4SF9在胚胎染色體正常的自然流產(chǎn)（流產(chǎn)組1）絨毛中表達

4、水平顯著低于正常早孕者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(IOD均值：53.22±35.47 Vs89.04±36.44；t=4.39，P=0.000)。
　?、赥M4SF9在染色體異常流產(chǎn)絨毛中的表達水平
　　然而，TM4SF9在胚胎染色體異常的流產(chǎn)組2中的表達水平顯著高于胚胎染色體正常流產(chǎn)組1，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（IOD均值：140.43±61.76 Vs53.22±35.47，P=0.000）。
　　2.蛻膜/子宮內(nèi)膜
　　

5、1）表達部位：
　　在未妊娠月經(jīng)期子宮內(nèi)膜未見表達，而在增殖期和分泌期子宮內(nèi)膜，自然流產(chǎn)和正常早孕蛻膜，及輸卵管妊娠術(shù)前診刮的的子宮內(nèi)膜中，TM4SF9均表達于蛻膜/子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞（decidual/endometrial stromal cells，DSC/ESC）和腺上皮細胞（glandular epithelialcells）的胞質(zhì)和胞膜。
　　2）表達水平：
　　①TM4SF9在絨毛染色體正常流產(chǎn)蛻膜中的表達

6、水平
　　在絨毛染色體正常的流產(chǎn)組（流產(chǎn)組1）和正常早孕組蛻膜，及分泌期子宮內(nèi)膜中，流產(chǎn)組1中TM4SF9表達最強（IOD均值：184.49±119.69）；正常早孕組次之（IOD均值：93.43±67.10）；分泌期子宮內(nèi)膜中表達最弱（IOD均值：88.56±33.24）。3組總體均數(shù)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=48.40，P=0.000）。
　　組間兩兩比較：自然流產(chǎn)組1和正常早孕蛻膜、分泌期子宮內(nèi)膜相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意

7、義（P均=0.000）。
　?、赥M4SF9在絨毛染色體異常流產(chǎn)蛻膜中的表達水平
　　TM4SF9在胚胎染色體異常（流產(chǎn)組2）的流產(chǎn)蛻膜中的表達水平略低于胚胎染色體正常的流產(chǎn)組1，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（IOD均值：147.22±84.78 Vs184.49±119.69；t=1.10，P=0.278）。
　?、跿M4SF9在正常早孕蛻膜和未妊娠子宮內(nèi)膜和中的表達水平
　　在增殖期、分泌期子宮內(nèi)膜和正常早孕蛻膜中，正

8、常早孕組TM4SF9表達水平（IOD均值：93.43±67.10）略高于增殖期、分泌期子宮內(nèi)膜（IOD均值：75.71±29.87、88.56±33.24），但3組總體均數(shù)相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（F=1.26，P=0.296）。
　　第二部分 TM4SF9在輸卵管妊娠母-胎界面的表達
　　1.絨毛中：
　　1）表達部位
　　在輸卵管妊娠絨毛組織中，TM4SF9主要表達于細胞滋養(yǎng)細胞及絨毛外細胞滋養(yǎng)細胞（EVCT）

9、的胞漿和胞膜上，合體滋養(yǎng)細胞中無表達。
　　2）表達水平：
　?、賂M4SF9在輸卵管妊娠絨毛中的表達水平
　　TM4SF9在輸卵管妊娠絨毛中表達水平顯著高于正常早孕組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（IOD均值：109.39±61.84 Vs89.04±36.44；t=2.33，P=0.023）。
　　2.蛻膜/子宮內(nèi)膜中
　　1）表達部位：
　　TM4SF9主要表達與蛻膜化或未蛻膜化的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞及腺體上皮

10、細胞的胞質(zhì)和胞膜。
　　2）表達水平：
　?、賂M4SF9在輸卵管妊娠子宮內(nèi)膜中的表達水平
　　在輸卵管妊娠、未妊娠分泌期子宮內(nèi)膜及正常早孕蛻膜中，輸卵管妊娠組TM4SF9表達最強（IOD均值：144.18±106.22）；正常早孕組次之（IOD均值：93.43±67.10）；分泌期子宮內(nèi)膜表達水平最低（IOD均值：88.56±33.24）。3組總體均數(shù)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=4.29，P=0.019）。組間兩兩比較

11、：輸卵管妊娠診刮子宮內(nèi)膜與正常早孕蛻膜、未妊娠分泌期內(nèi)膜相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P分別為0.037、0.018）。
　?、赥M4SF9在輸卵管妊娠（蛻膜化/未蛻膜化）子宮內(nèi)膜中的表達水平
　　TM4SF9在蛻膜化的子宮內(nèi)膜中表達水平高于未蛻膜化的子宮內(nèi)膜，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義（IOD均值：166.73±106.11 Vs119.25±100.31，t=1.47，P=0.151）。
　　3.在輸卵管粘膜中
　　1

12、）表達部位：
　　在輸卵管妊娠患者及輸卵管絕育術(shù)患者切除的輸卵管組織中，TM4SF9主要表達于輸卵管粘膜上皮的纖毛細胞及部分蛻膜化的輸卵管間質(zhì)細胞的胞質(zhì)和胞膜上，而分泌細胞則未見表達。
　　2）表達水平：
　　在未妊娠輸卵管粘膜、妊娠輸卵管粘膜和輸卵管妊娠子宮內(nèi)膜中，妊娠輸卵管粘膜中TM4SF9表達水平最強（IOD均值：228.92±133.67）；輸卵管妊娠患者診刮的子宮內(nèi)膜中水平其次（IOD均值：144.18±10

13、6.22）；未妊娠輸卵管粘膜中表達最弱（IOD均值：63.57±26.74）。3組總體均數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=57.89，P=0.000）。組間多重比較：妊娠輸卵管粘膜與未妊娠輸卵管粘膜、輸卵管妊娠子宮內(nèi)膜相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P分別為0.000、0.009）。
　　結(jié)論
　　1)綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)TM4SF9在母-胎界面廣泛表達，其表達水平的異?？赡芘c妊娠丟失及異位妊娠相關(guān)。
　　2)正常宮內(nèi)妊娠的子宮