膜結(jié)合型人類白細(xì)胞抗原G在胚胎植入及母胎免疫耐受中作用的實驗研究.pdf

1、背景：
　　成功的胚胎植入是成功妊娠的開始，在胚胎植入過程中，重要標(biāo)志是滋養(yǎng)層細(xì)胞向子宮內(nèi)膜侵入，在這個過程中涉及到很多分子水平的變化。人類白細(xì)胞抗原G（HLA-G）在滋養(yǎng)層細(xì)胞尤其是絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞高表達(dá)，提示它在胚胎植入過程中發(fā)揮著重要作用。
　　目的：
　　1）建立穩(wěn)定表達(dá)HLA-G1的滋養(yǎng)細(xì)胞株，為研究 HLA-G在滋養(yǎng)細(xì)胞的功能提供有效的工具；
　　2）探討人類白細(xì)胞抗原G（HLA-G）在介導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞免

2、疫耐受以及對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、黏附及侵襲能力的影響，了解HLA-G基因在胚胎植入及子宮螺旋動脈重塑過程中的作用。
　　方法：
　　1）包裝HLA-G1慢病毒并以之轉(zhuǎn)染 HLA-G表達(dá)陰性的人滋養(yǎng)細(xì)胞系；
　　2）檢測HLA-G1對 NK-92MI細(xì)胞對 JAR細(xì)胞細(xì)胞毒作用的影響；
　　3）分別用CCK-8比色法、溴脫氧尿苷（BrdU）ELISA法檢測實驗組（穩(wěn)定表達(dá)HLA-G1）和對照組細(xì)胞增殖能力的變化，流式細(xì)胞

3、技術(shù)分析其相對應(yīng)細(xì)胞周期和凋亡的變化。
　　4）細(xì)胞外基質(zhì)陣列比色法、纖維連接蛋白鋪底加CCK-8比色法以及子宮內(nèi)膜細(xì)胞鋪底加CCK-8比色法檢測實驗組和對照組細(xì)胞黏附能力的變化。
　　5）穿膜小室侵襲實驗（Transwell）分別檢測實驗組和對照組細(xì)胞侵襲能力的變化，以及缺氧和肝細(xì)胞生長因子（Hepatocyte growth factor, HGF）對各組侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1）通過慢病毒轉(zhuǎn)染的

4、HLA-G1可以在兩種不同的滋養(yǎng)細(xì)胞株穩(wěn)定表達(dá)；
　　2）從效靶比為1.25：1開始，NK-92MI細(xì)胞對對照組的細(xì)胞毒作用開始強(qiáng)于實驗組，隨著效靶比的增加，抑制作用越發(fā)明顯（P<0.05）；
　　3）實驗組與對照組比較，CCK-8的吸光度值，BrdU ELISA檢測的吸光度值均無明顯差異（P＞0.05），流式細(xì)胞分析 S期細(xì)胞比例實驗組為(47.07±3.15)％，對照組為(46.29±0.77)%。兩組比較無統(tǒng)計學(xué)意義（

5、P＞0.05）；兩組均無明顯細(xì)胞凋亡；
　　4）細(xì)胞外基質(zhì)陣列比色法、纖維連接蛋白鋪底加 CCK8比色法、子宮內(nèi)膜細(xì)胞鋪底加CCK-8比色法檢測實驗組與對照組吸光度值，兩組相比較，吸光度值均無明顯差異（P＞0.05）；
　　5）Transwell小室中的穿膜細(xì)胞數(shù)，實驗組（66±19）與空白對照組（67±17）比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），加入肝細(xì)胞生長因子后，實驗組（40±20）浸潤能力較對照組（66±19）有明顯減弱

6、（P＜0.05）；在缺氧條件下，JAR的浸潤能力下降，但HLA-G1對 HGF介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲的抑制作用也變得不再顯著（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1）HLA-G是一個重要的免疫抑制分子，在介導(dǎo)母胎免疫耐受中發(fā)揮重要作用；
　　2）HLA-G不能作為一個獨(dú)立因素影響滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、黏附、浸潤功能；
　　3）HLA-G可以抑制HGF介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲作用，這種抑制效應(yīng)在缺氧條件下會減弱或消失。提示HLA-G可能與其