多烯紫杉醇Pluronic P105-F127混合膠束用于治療多藥耐藥腫瘤的研究.pdf

1、腫瘤的多藥耐藥是(Multidrug resistance，MDR)是當今腫瘤化療的一大障礙，也是多數(shù)腫瘤患者化療失敗，預(yù)后不佳的主要原因。迄今，許多抗腫瘤藥物在臨床上都出現(xiàn)了多藥耐藥性。由于Pluronic具有既增溶藥物，又能實現(xiàn)逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的效果，本文構(gòu)建了新型的Pluronic混合膠束系統(tǒng)—NGR多肽修飾的Pluronic P105/F127混合膠束，除增溶疏水性的抗腫瘤藥物多烯紫杉醇，逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的作用外，期望通過存在于腫瘤

2、新生血管上的CD13受體介導(dǎo)該系統(tǒng)進入腫瘤細胞，以期進一步提高對多藥耐藥腫瘤的治療效果。為探索逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性的載體給藥途徑提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　本文第一章通過Pluronic P105和F127為材料采用薄膜水化法制備了載多烯紫杉醇的混合膠束(PF-DTX)。以ER％、DL％和DTX pre％為考察指標，在單因素考察的基礎(chǔ)上，應(yīng)用星點設(shè)計設(shè)計進行優(yōu)化，得到較優(yōu)處方與制備工藝。制備得到的PF-DTX包封率為92.40％，

3、載藥量為1.81％。制備得到的PF-DTX粒徑約為23nm，且單峰分布，外觀呈圓球狀;Pluronic P105/F127(75.92∶24.08，w/w)的CMC為0.0056％(w/v);PF-DTX在體外具有緩釋效應(yīng)，在4℃下貯存可保持6個月的穩(wěn)定性。
　　第二章為了進一步考察PF-DTX在逆轉(zhuǎn)多藥耐藥腫瘤前景，以紫杉醇耐藥株細胞(A549/Taxol)為多藥耐藥細胞模型，評價了載多烯紫杉醇Pluronic P105/F12

4、7混合膠束(PF-DTX)在體外逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的能力。CCK8法測定PF-DTX對A549細胞的抑制效果與Taxotere無顯著性差異;而PF-DTX對A549/Taxol細胞的IC50值顯著低于Taxotere組。細胞攝取實驗結(jié)果顯示，在Pluronic P105/F127的存在下，A549/Taxol對羅丹明123(R123)和DTX的攝取均顯著增加(p＜0.01)。線粒體膜電勢測定表明，在Pluronic存在下，細胞內(nèi)線粒體膜電位

5、降低。細胞凋亡與周期測定結(jié)果顯示，與Taoxtere相比，PF-DTX處理的A549/Taxol細胞處于早期凋亡以及晚期凋亡的細胞均顯著增多(p＜0.05)，對A549/Taxol細胞在G2/M期的捕獲能力顯著增強。上述結(jié)果表明，Pluronic P105/F127可與DTX協(xié)同作用，增加DTX的入胞量，故具有一定逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的能力。
　　第三章首先合成了羧基化Pluronic F127，通過采用DCC和NHS活化羧基生成F12

6、7-NHS，并進一步將NGR小分子肽通過酰胺鍵接枝到F127端形成功能化的NGR-F127。構(gòu)建的NGR-PF-DTX靶向遞藥系統(tǒng)粒徑約為25nm，所測得的ζ電位為-13.77±1.30mv;載藥量、包封率以及體外釋放行為與普通膠束相比均沒有顯著變化。細胞毒性結(jié)果顯示，NGR-PF-DTX對HUVEC的IC50值為8.03ng/ml，顯著小于PF-DTX組(p＜0.01)。熒光顯微鏡觀察細胞攝取，結(jié)果表明HUVEC細胞攝取NGR修飾的膠

7、束綠色熒光強度顯著強于普通膠束。加入NGR多肽后細胞攝取NGR膠束的綠色熒光有所減弱。流式定量結(jié)果顯示NGR膠束組的平均熒光強度與普通膠束組相比有顯著性差異(p＜0.01);加入競爭抑制劑NGR多肽后攝取NGR膠束的熒光強度顯著減弱(p＜0.05)。采用活體成像技術(shù)考察膠束在荷瘤小鼠體內(nèi)的分布，結(jié)果證明了NGR的修飾有利于膠束體系通過腫瘤新生血管富集于腫瘤靶部位，增加對實體瘤靶向性。藥動學(xué)結(jié)果顯示膠束制劑能夠明顯提高DTX的體內(nèi)循環(huán)時間

8、，AUC值與MRT值均顯著高于市售制劑組(p＜0.05)，表明膠束制劑可以利用腫瘤的EPR效應(yīng)提高藥物在腫瘤靶部位的濃度。通過測定給藥后腫瘤體積大小，評價了各組制劑的藥效，結(jié)果表明Taxotere組腫瘤重量與生理鹽水組相比無顯著性差異，而PF-DTX組的腫瘤重量顯著低于Taxotere組(p＜0.05)，其抑瘤率(69.05％)約為Taxotere組(34.42％)的2倍;NGR-PF-DTX組表現(xiàn)出更明顯的腫瘤治療效果，抑瘤率(82.

9、95％)約為Taxotere組其他的2.4倍，其腫瘤重量顯著低于PF-DTX組(p＜0.05)。綜上表明，PF-DTX的抗MDR腫瘤效果顯著優(yōu)于Taxotere組，而且NGR修飾的主動靶向膠束治療多藥耐藥腫瘤效果更為明顯。
　　第四章對構(gòu)建的膠束體系在健康BALB/c小鼠體內(nèi)進行了毒性的初步評價。病理學(xué)切片觀察、血液學(xué)檢查和肝腎功能檢查等初步評價結(jié)果顯示普通膠束以及NGR靶向膠束均未顯示明顯的體內(nèi)毒副性，我們認為Pluronic