SIc33a1錯義突變S113R導(dǎo)致小鼠純合胚胎早期致死.pdf

1、[研究背景]
　　 SLC33A1(Solutecarrierfamily33，member1)是在研究神經(jīng)節(jié)苷脂O-乙酰化的過程中被發(fā)現(xiàn)的一個基因，位于人類染色體3q25，因為其可以將細(xì)胞質(zhì)中的乙酰輔酶A轉(zhuǎn)運(yùn)至高爾基體，為神經(jīng)節(jié)苷脂O-乙?；峁┮阴；?，所以又名AT-1(theacetyl-CoAtransporter1)。研究發(fā)現(xiàn)很多內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白可以被SLC33A1調(diào)節(jié)，包括β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(β-siteAPPcle

2、avingenzyme1，BACE1)、淀粉樣蛋白前體（amyloidproteinprecursor，APP）和低密度脂蛋白受體(lowdensitylipoproteinreceptor，LDLR)等，這些蛋白質(zhì)在翻譯修飾后對于膜結(jié)構(gòu)的組裝和分泌蛋白的運(yùn)輸有重要作用。如果SLC33A1的表達(dá)異常，則會引起一系列神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病，如散發(fā)性肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，ALS)、晚發(fā)性阿爾茨海

3、默病(Alzheimer'sdisease，AD)等。
　　 本實驗室2008年在山東青島地區(qū)發(fā)現(xiàn)了一個遺傳性痙攣性截癱(hereditaryspasticparaplegia，HSP)大家系，呈常染色體顯性遺傳。采用全基因組掃查方法和定位候選策略確定人類SLC33A1基因是該家系的致病基因，患者均攜帶S113R錯義突變，家系中的正常個體和群體中未檢測到該突變。斑馬魚實驗顯示，抑制斑馬魚slc33a1基因表達(dá)影響運(yùn)動神經(jīng)元軸突生

4、長，這種異常能被人類野生型SLC33A1基因拯救而不能被突變型拯救。由以上研究可知，SLC33A1對于維持神經(jīng)元正常功能非常重要，但SLC33A1表達(dá)異常導(dǎo)致HSP的作用機(jī)制尚不明確，因此，有必要深入研究和探討SLC33A1蛋白的功能和作用機(jī)制。
　　 [研究目的]
　　 通過構(gòu)建slc33a1突變基因敲入小鼠模型，檢測SLC33A1突變對小鼠表型的影響，以探討SLC33A1的功能。
　　 [研究方法]
　

5、　 構(gòu)建slc33a1突變基因敲入小鼠模型，并通過Slc33a1突變基因敲入小鼠的雜合子與雜合子交配，檢測子代小鼠基因型是否符合預(yù)期分離比例。如果不能得到純合子新生小鼠，提示純合子小鼠在胚胎期致死，則通過解剖雜合子與雜合子交配的孕鼠分離得到不同胚胎時期的胎鼠(E3.5、E7.5、E18.5)，利用單純PCR擴(kuò)增法和PCR-RFLP法對胎鼠進(jìn)行基因型鑒定。根據(jù)以上各個發(fā)育時期胚胎的基因型鑒定和分型結(jié)果，確定純合子小鼠的致死時間。

6、　　 [研究結(jié)果]
　　 成功構(gòu)建slc33a1突變基因敲入小鼠模型。對雜合子小鼠交配子代基因型分析結(jié)果顯示，可以獲得預(yù)期比例的雜合子，但不能得到純合子小鼠，提示純合子小鼠胚胎期致死。通過解剖與雜合子雄鼠交配的雜合子孕鼠，得到的E7.5和E18.5胚胎均無純合子，E3.5胚胎有少量純合子存活。
　　 [結(jié)論]
　　 SLC33A1基因突變導(dǎo)致純合子小鼠胚胎早期致死，SLC33A1對早期胚胎發(fā)育有非常重要的作用。