Shkbp1等幾種基因工程小鼠純合品系的建立.pdf

1、研究背景和目的：
　　 當(dāng)前，利用遺傳工程方法制作人類疾病的基因工程小鼠已成為研究人類重大疾?。ò▊魅静?、腫瘤、心血管疾病、代謝性疾病、老年性疾病、精神性疾病及遺傳病等）的重要方法和手段。與普通實(shí)驗(yàn)小鼠相比，基因工程小鼠具有無法比擬的巨大優(yōu)勢，它能夠模擬人類疾病在體內(nèi)的自然發(fā)生過程，更有利于臨床治療研究和藥物開發(fā)，同時它又能夠?qū)⒓膊〉臋C(jī)理研究推進(jìn)到分子水平，更有利于新的藥物靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)。
　　 用基因工程小鼠與自發(fā)疾病小

2、鼠模型雜交，來研究目的基因在疾病中的作用，是目前人類重大疾病功能基因研究中最先進(jìn)的技術(shù)。為了更準(zhǔn)確的研究上述基因在炎癥、腫瘤等疾病中的功能，充分利用基因工程小鼠模型在生命科學(xué)研究的巨大優(yōu)勢，本實(shí)驗(yàn)室依據(jù)研究方向構(gòu)建了4種基因工程小鼠，分別是Shkbp1基因剔除小鼠，SGTa基因剔除小鼠，pVA-hCD2-Nef基因剔除小鼠和胰島過表達(dá)Slit2蛋白的Rip-hSlit2小鼠，并用遺傳學(xué)方法獲得具有穩(wěn)定遺傳背景的純合子小鼠，希望通過與Ap

3、oE KO, Rip1-Tag2, ApcMin, TRAMP和MMTV-PvMT等疾病小鼠雜交，發(fā)現(xiàn)相關(guān)基因在炎癥、腫瘤和血管疾病中的作用。
　　 方法：
　　 1基因工程小鼠的飼養(yǎng)各品系基因工程小鼠飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境下，根據(jù)需要進(jìn)行配種，將哺乳期結(jié)束的幼鼠及時分籠，為純合子小鼠的篩選做好準(zhǔn)備。
　　 2 穩(wěn)定遺傳的基因工程小鼠品系的建立與純合子的篩選采用經(jīng)典遺傳學(xué)中的孟德爾定律將轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行一定方式的交配，

4、結(jié)合PCR方法檢測目的基因。
　　 3 Shkbp1基因?qū)π∈竽[瘤生長的影響利用Shkbp1基因剔除純合子小鼠為實(shí)驗(yàn)組，野生型129小鼠作為對照組，建立B16 黑色素瘤皮下移植瘤模型，通過測量腫瘤體積、腫瘤重量，初步探討Shkbp1敲除后對小鼠腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、通過129小鼠與F2代陽性小鼠測交，檢測子代小鼠的基因型，篩選出1只雄性、3只雌性Shkbp1小鼠，其子代基因鑒定結(jié)果陽性率

5、為100％；篩選出2只雄性、1只雌性SGTa小鼠，其子代基因鑒定結(jié)果陽性率為100％；pVA-hCD2-Nef小鼠，Rip-hSlit2小鼠篩選仍在進(jìn)行中。
　　 2、Shkbp1敲除對小鼠B16 皮下移植瘤具有抑制趨勢，但是統(tǒng)計結(jié)果沒有顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、成功構(gòu)建了Shkbp1基因剔除的純合子小鼠，并初步驗(yàn)證了Shkbp1基因在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中的作用；2、成功構(gòu)建了SGTa基因的純合子小鼠模型