慢病毒介導(dǎo)hsa-miR-223過表達對K562細胞生物學(xué)特性影響的實驗研究.pdf

1、分類號：分類號：R733.7R733.7學(xué)校代碼：學(xué)校代碼：103910392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼:100208:100208學(xué)號：學(xué)號：21210032292121003229碩士碩士學(xué)位學(xué)位論文論文論文題目論文題目：慢病毒介導(dǎo)慢病毒介導(dǎo)hsamiR223過表達對過表達對K562細胞生物學(xué)特性影響的實驗研究胞生物學(xué)特性影響的實驗研究EffectsoflentivirusmediatedhsamiR223overexpression

2、onbiologicalpropertiesofK562學(xué)位類別：別：醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)碩士碩士所在學(xué)院：協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院申請人姓名：莫慧玲姓名：莫慧玲學(xué)科、?？?、專業(yè)：臨床檢驗診斷學(xué)業(yè)：臨床檢驗診斷學(xué)導(dǎo)師：曹穎平師：曹穎平教授教授答辯委員會主席：伍嚴(yán)安答辯委員會主席：伍嚴(yán)安教授教授研究起研究起止時間：止時間：20142014年1111月至月至20152015年5月答辯日期：期：20152015年5月2929日二○一五○一五年五月目錄

3、中文摘要中文摘要................................................................................................1Abstract.................................................................................................3前言.......

4、...........................................................................................5第一部分第一部分miRmiR223223慢病毒過表達重組載體質(zhì)粒的構(gòu)建慢病毒過表達重組載體質(zhì)粒的構(gòu)建及在及在K562K562細胞細胞中的表達情況中的表達情況..................................................

5、......................................81材料..............................................................................................81.1細胞株.............................................................................

6、.........81.2慢病毒載體系統(tǒng)......................................................................81.3慢病毒載體構(gòu)建及表達的主要試劑.......................................81.4慢病毒載體構(gòu)建及表達的主要儀器.......................................91.5其他實驗所需的主要試

7、劑和主要儀器..................................91.6主要試劑的配置....................................................................102實驗方法....................................................................................122.1PCR擴增

8、目的基因片段.........................................................122.2割膠回收................................................................................132.3大腸桿菌感受態(tài)的制備.....................................................

9、...142.4目的基因同源重組入表達載體............................................142.5重組質(zhì)粒鑒定........................................................................162.6陽性重組質(zhì)粒的大量抽提....................................................163慢

10、病毒的包裝............................................................................173.1包裝病毒293T細胞的復(fù)蘇................................................173.2293T細胞的傳代...........................................................

11、.......173.3陽性重組質(zhì)粒的細胞轉(zhuǎn)染....................................................183.4慢病毒的收獲和濃縮............................................................183.5慢病毒滴度測定...........................................................