短期禁食對(duì)60CO-γ射線照射損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 建立動(dòng)物與細(xì)胞的短期禁食(STS)模型，探討短期禁食對(duì)60Co-γ射線照射損傷的拮抗作用及機(jī)制，分析短期禁食對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的差異抵抗力(DSR)。
　　 方法:
　　 1、短期禁食對(duì)動(dòng)物放射線損傷保護(hù)作用的初步研究:(1)建立動(dòng)物照射損傷模型:32只ICR小鼠隨機(jī)分為4組，包括對(duì)照組、12h禁食組、48h禁食組、72h禁食組，每組8只，雌雄各半。禁食結(jié)束后均給予7.5Gy60Co-γ射線(劑量

2、率為2.5Gy/min)一次性全身照射，照射后恢復(fù)給食，持續(xù)觀察3周，記錄各組小鼠的一般狀況、體重變化、食物消耗量及死亡情況。(2)18只雌性ICR小鼠隨機(jī)分為3組，包括對(duì)照組、0h禁食照射組、72h禁食照射組，不同禁食時(shí)間組ICR小鼠禁食后同時(shí)給予7.5Gy60Co-γ射線(劑量率為2.5Gy/min)一次性全身照射，照射后各組恢復(fù)給食。于照射后24h稱量臟器重量，測(cè)定外周血白細(xì)胞數(shù)(WBC)，并檢測(cè)分析活性氧(ROS)、超氧化物歧化

3、酶(SOD)、丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(T-AOC)以及內(nèi)源性氮氧化物合酶(eNOS)等指標(biāo)。
　　 2、葡萄糖限制對(duì)正常細(xì)胞V79與腫瘤細(xì)胞A54960Co-γ射線照射損傷產(chǎn)生差異作用及機(jī)制研究:(1)建立細(xì)胞照射損傷模型:將V79和A549細(xì)胞分成對(duì)照組(0Gy照射組)、8Gy照射組、10Gy照射組和12Gy照射組，共4組，分別給予0、8、10、12Gy60Co-γ射線(劑量率為0.5Gy/min)，選擇最佳照射劑量。

4、(2)建立細(xì)胞短期禁食模型:通過培養(yǎng)基中葡萄糖濃度與血清濃度的變化將V79和A549細(xì)胞分為9組，包括:3.0g/l高糖+10％血清組、1.0g/l正常糖+10％血清組、0.5g/l低糖+10％血清組、3.0g/l高糖+5％血清組、1.0g/l正常糖+5％血清組、0.5g/l低糖+5％血清組、3.0g/l高糖+1％血清組、1.0g/l正常糖+1％血清組與0.5g/l低糖+1％血清組。采用CCK-8法測(cè)定V79與A549細(xì)胞于60Co-γ

5、射線照射前后的細(xì)胞增殖率，運(yùn)用SAS軟件對(duì)葡萄糖濃度、血清含量與60Co-γ射線照射量三種因素進(jìn)行交互作用分析，篩選最佳的細(xì)胞短期禁食(STS)模型。(3)V79與A549細(xì)胞差異抵抗力的研究:將V79和A549細(xì)胞各組細(xì)胞進(jìn)行短期禁食后，給予60Co-γ射線最佳劑量的照射，比較兩種細(xì)胞的一般生物學(xué)狀況（生長(zhǎng)狀況、細(xì)胞周期和凋亡率等），抗氧化能力(ROS、SOD、MDA)以及線粒體膜電位(MMP)。
　　 結(jié)果:
　　

6、1、(1)動(dòng)物模型的建立:60Co-γ射線照射后ICR小鼠均出現(xiàn)興奮反應(yīng)，48h、72h禁食組小鼠很快恢復(fù)正常，而0h、12h禁食組小鼠出現(xiàn)興奮反應(yīng)后出現(xiàn)不同的毒性癥狀直至死亡。0h、12h、48h、72h禁食組小鼠存活率分別為0、0、12.5％、50％。(2)60Co-γ射線照射后，72h禁食組小鼠ROS生成量明顯低于0h禁食組，而eNOS活性明顯高于0h禁食組。72h禁食組小鼠SOD、T-AOC活性明顯低于0h禁食組。MDA含量各組

7、間無明顯差異。
　　 2、(1)60Co-γ射線照射后，照射劑量與細(xì)胞增殖率有一定的相關(guān)性，當(dāng)照射劑量為12Gy時(shí)，V79與A549細(xì)胞的存活率分別為70％與50％。在這個(gè)劑量下兩種細(xì)胞的毒性作用和差異抵抗力可能會(huì)產(chǎn)生。(2)由于血清限制因素與照射因素之間存在交互作用，因此選擇葡萄糖限制作為細(xì)胞短期禁食(STS)的處理因素。(3)60Co-γ射線照射后，V79細(xì)胞高糖、正常糖、低糖組細(xì)胞增殖率降低程度分別為46％、23％、1％，

8、A549細(xì)胞，高糖、正常糖、低糖組細(xì)胞增殖率降低程度分別約為37％、50％、48％;與正常糖與高糖組比較，V79細(xì)胞低糖組細(xì)胞凋亡率顯著性降低(P＜0.05)，而A549細(xì)胞各組之間無顯著性差異;V79細(xì)胞高糖組S期明顯延長(zhǎng)，G0/G1、G2/M期明顯縮短，正常糖組S期較于高糖組明顯縮短，G0/G1明顯延長(zhǎng)，低糖組S期所占比例基本恢復(fù)正常，并且G2/M期較高糖、正常糖組明顯延長(zhǎng)(P＜0.05)。較于正常組，A549細(xì)胞高糖、正常糖、低糖

9、組G0/G1期均顯著性縮短，S期均顯著性延長(zhǎng)，但各組之間無差異;與正常糖與高糖組比較，V79細(xì)胞低糖組ROS生成量顯著性降低，SOD活性顯著性升高(P＜0.05)，而A549細(xì)胞ROS生成量顯著性升高，SOD活性顯著性降低(P＜0.05);V79細(xì)胞高糖、正常糖與低糖組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，A549細(xì)胞低糖組較高糖、正常糖組MMP顯著性降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.短期禁食具有抵抗60C