擬南介轉(zhuǎn)錄因子NF-YA10生物學(xué)功能的初步研究.pdf

1、NF-Y是一類結(jié)合CCAAT-box的重要轉(zhuǎn)錄因子，包括三個(gè)亞基，NF-YA、NF-YB和NF-YC。在擬南芥中已鑒定了10個(gè)NF-YA，13個(gè)NF-YB和13個(gè)NF-YC基因。NF-Y家族在植物的生長(zhǎng)發(fā)育及逆境反應(yīng)中發(fā)揮了重要調(diào)控作用并受到miR169家族成員的調(diào)控.我們對(duì)擬南芥轉(zhuǎn)錄因子NF-YA10生物學(xué)功能進(jìn)行了初步研究。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　1、構(gòu)建AtNF-YA10過表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化擬南芥，獲得過表達(dá)AtNF-YA

2、10轉(zhuǎn)基因擬南芥純系，并對(duì)其表型進(jìn)行研究鑒定。主要包括抗逆表型、開花表型及葉片發(fā)育表型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)株系在抗逆表型和開花表型上與野生型無明顯差異，過表達(dá)株系有比野生型更大的蓮座，說明過表達(dá)AtNF-YA10促進(jìn)了擬南芥葉子的發(fā)育。
　　2、對(duì)過表達(dá)AtNF-YA10轉(zhuǎn)基因擬南芥純系進(jìn)行生長(zhǎng)素相關(guān)表達(dá)譜芯片分析。找出了5個(gè)與生長(zhǎng)素相關(guān)的AtNF-YA10可能的靶基因。
　　3、利用雌激素誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)構(gòu)建雌激素誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄

3、激活系統(tǒng)調(diào)控的AtNF-YA10∶3×flag融合基因植物表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化擬南芥，獲得轉(zhuǎn)基因純系，并對(duì)其表達(dá)外源AtNF-YA10∶3×flag蛋白的條件進(jìn)行了優(yōu)化。選定1/2MS培養(yǎng)基生長(zhǎng)10天的雌激素誘導(dǎo)16h為最優(yōu)的表達(dá)條件。
　　4、以雌激素誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)調(diào)控的AtNF-YA10∶3×flag融合基因轉(zhuǎn)基因純系為材料對(duì)NF-YA10進(jìn)行CHIP實(shí)驗(yàn)，分析通過表達(dá)譜芯片找出的生長(zhǎng)素相關(guān)的基因是否為AtNF-YA10真正的靶