幾種水產動植物中脂肪氧合酶的性質研究.pdf

1、本文從綠藻條滸苔（enteromorpha clathrata）中用水提法提取脂肪氧合酶（lipoxygenase ，LOX），并經(jīng)Q Sepharose F F陰離子交換層析、Sephacryl S-300 H R凝膠過濾層析等方法進行分離純化，得到兩個組分（LOX-1＃ 和LOX-2＃），經(jīng)SDS-PAGE電泳后各顯示單一的蛋白條帶，分子量分別為102.0和79.0 kDa。部分酶學性質研究結果表明LOX-1＃、LOX-2＃ 都有著

2、較好的熱穩(wěn)定性，最適溫度分別為30、25℃；在pH6.0～10.0區(qū)間穩(wěn)定性良好，最適pH分別為10.0和8.6。底物特異性研究表明LOX-1＃ 、LOX-2＃ 對底物的親和性依次為亞油酸>花生四烯酸>亞麻酸，以亞油酸為底物時，Km值分別為0.23mM、0.20mM。BHA、BHT、TBHQ等抗氧化劑對LOX-1＃ 、LOX-2＃ 有一定的抑制作用，Ca2+對LOX有明顯的激活作用，而Hg2+對LOX有顯著的抑制作用，其它金屬離子影響較

3、小。 用羥基磷灰石柱層析法對尼羅羅非魚鰓組織脂肪氧合酶進行了初步純化，純化倍數(shù)達到了15.26倍，回收率為75.13﹪。對酶的部分性質研究表明，最適溫度為30℃，最適pH分別為10.0和4.0，可能存在著兩種或以上的同工酶形式。因此，分別在兩個pH條件下對該酶的酶學性質進行了研究。以亞油酸為底物時，在pH10.0的條件下，最適底物濃度為2.5 10-4M，Km值為0.073 mM。EDTA對該酶有較強的抑制作用。而在pH4.0的

4、條件下，最適底物濃度為5 10-4M，Km值為2.71mM。底物特異性研究結果表明在pH4.0的條件下該酶更傾向于親和亞麻酸；而在pH10.0時對底物的親和力大小依次為亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸。 同樣用羥基磷灰石柱層析法對南美白對蝦血淋巴脂肪氧合酶進行了初步純化和部分酶學性質研究。酶的最適溫度為25℃，最適pH為9.6，酶活相對較低，分別為羅非魚鰓組織LOX活力的28.05﹪，滸苔LOX-1＃、LOX-2＃ 活力的0.26﹪和

5、0.20﹪。以亞油酸為底物時，最適底物濃度為2.5×10<'-4>M，Km值為0.5 mM，Vmax值為1.67 103 U/mg protein.min。加入1mM的谷胱苷肽大大提高了酶液的穩(wěn)定性。底物特異性研究結果表明酶對不同不飽和脂肪酸的親和力依次為C20：4>C18：2>C18：3。 用正相液相色譜對上述三種來源的LOX催化亞油酸甲酯形成的氫過氧化物進行了分析。結果表明，滸苔LOX-1＃ 催化亞油酸甲酯氧化主要形成9-氫