水產(chǎn)品中常見重要致病菌基因芯片技術(shù)的研究.pdf

1、致病菌引起的水產(chǎn)品污染問題是影響水產(chǎn)品安全的關(guān)鍵問題之一，嚴(yán)重危害著人類的健康。近年來由于水產(chǎn)品致病菌引起的食物中毒事件不斷增加，為了更好預(yù)防水產(chǎn)品致病菌中毒事件的發(fā)生，最關(guān)鍵的是尋找快速而準(zhǔn)確水產(chǎn)品致病菌的檢測技術(shù)。
　　 由于水產(chǎn)品的味道鮮美，營養(yǎng)價值高，近年來受到廣大消費(fèi)者的青睞。但是由于水產(chǎn)品而引起的食物中毒事件已經(jīng)引起了世界范圍內(nèi)的廣泛關(guān)注，對水產(chǎn)品致病菌實現(xiàn)快速檢測具有現(xiàn)實意義。本文以水產(chǎn)品中11類重要致病菌作為研究

2、對象，運(yùn)用寡核苷酸芯片技術(shù)在基因水平上進(jìn)行分子學(xué)檢測方法的研究。利用16S-23S rRNA基因間區(qū)(Internal transcribed spacer，ITS)設(shè)計引物探針作為正對照，以沙門氏菌的invA、副溶血弧菌toxR、霍亂弧菌rfbE、單增李斯特氏菌hlyA、金黃色葡萄球菌nuc、化膿性鏈球菌speB、創(chuàng)傷弧菌rpoS、志賀氏菌ipaH、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌ail基因作為靶基因，奇異變形桿菌、普通變形桿菌的16S-23S

3、rRNA基因作為靶基因篩選適合這11種菌的特異分子標(biāo)識，并研制水產(chǎn)品中重要致病菌檢測基因芯片。
　　 以ITS、invA、toxR、rfbE，hlyA、nuc、speB、rpoS、ipaH及ail基因作為靶基因，設(shè)計了種屬特異性探針，經(jīng)過反復(fù)篩選驗證得到特異探針26條。另外設(shè)計了背景檢測探針1條，熒光探針1條，以ITS為靶基因設(shè)計11類水產(chǎn)品致病菌的通用探針1條，共計29條。之后點制基因芯片、進(jìn)行了雜交液研制、雜交溫度、雜交時間

4、、PCR擴(kuò)增標(biāo)記等優(yōu)化實驗，并對芯片的特異性及靈敏度進(jìn)行評價，同時進(jìn)行模擬樣品實驗及實際樣品實驗對芯片的應(yīng)用性能進(jìn)行評價。
　　 本研究建立了使用寡核酸芯片檢測水產(chǎn)品中常見重要致病菌的方法。該方法不僅操作簡便、快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高，而且具有良好的應(yīng)用價值，為水產(chǎn)品常見致病菌檢測提供了一定的理論依據(jù)和技術(shù)參考，并為食品致病菌檢測提供一定的依據(jù)，在微生物檢測領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景，如可以用于臨床樣品檢測、環(huán)境監(jiān)測、出入境檢驗檢疫