高產(chǎn)油脂菌株選育及其油脂提取工藝研究.pdf

1、油脂既是構(gòu)成和維持生命活動的基本物質(zhì)之一，也是重要的工業(yè)原料，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。目前油脂資源主要來源于動植物，隨著人們對微生物油脂研究的不斷深入，利用微生物發(fā)酵法獲得油脂，不但可以緩解動植物油脂資源緊缺的局面，而且產(chǎn)油微生物可以進(jìn)行廢棄物的資源化再利用，為油脂資源的獲得提供了一條新的途徑。
　　 本論文以粘紅酵母(Rhodotorula glutinis)31596為研究對象，從培養(yǎng)基優(yōu)化、高產(chǎn)菌株的誘變、油脂提取工藝優(yōu)化等三

2、個方面選育高產(chǎn)油脂菌株。主要研究工作如下：
　　 1．基礎(chǔ)產(chǎn)脂培養(yǎng)基的優(yōu)化
　　 在溫度28 ℃，初始pH5.8，接種量5[％]，250mL搖瓶娤液量40mL的培養(yǎng)條件下，確定粘紅酵母(Rhodotorula glutinis)31596搖瓶發(fā)酵的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基成分(g/L)：葡萄糖80，硫酸銨1.11，磷酸二氫鉀2.5，蛋白胨1.8；其生物量和油脂量分別達(dá)到了18.18±3.34g/L和32.06±1.91mg/g。<

3、br>　　 2．高產(chǎn)油脂菌株的誘變選育
　　 為了進(jìn)一步提高其菌體生物量和菌體油脂量，以粘紅酵母(Rhodotorula glutinis)31596為出發(fā)菌株，對其進(jìn)行低能離子注入誘變和紫外誘變，經(jīng)過初篩、復(fù)篩，獲得一株油脂高產(chǎn)菌株VB19。該突變菌株搖瓶培養(yǎng)96h，生物量達(dá)21.63±1.14g/L，油脂量達(dá)42±1.78mg/g，分別比出發(fā)菌株提高19[％]和31[％]，連續(xù)傳代多次，其產(chǎn)量性狀無顯著變化。
　　

4、 3．粘紅酵母油脂提取工藝的優(yōu)化
　　 通過研究酸熱法、超聲波法和酸熱耦合超聲波法對粘紅酵母Rhodotorula glutinis微生物油脂提取的影響，結(jié)果顯示酸熱耦合超聲波法效果最好。在酸熱耦合超聲波法提取油脂的過程中，通過Plackett-Burmen試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以P<0.05為準(zhǔn)，篩選出酸處理時間(P=0.0360)、超聲處理時間(P=0.0105)、提取液配比(VCHCl3:VCH3OH)(P=0.0105)三個對粘紅酵

5、母Rhodotorula glutinis油脂提取具有顯著影響的因素。在此基礎(chǔ)上，通過Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對酸處理時間、超聲處理時間、提取液配比(VCHCl3:VCH3OH)三個顯著因子進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化，得到最佳工藝參數(shù)為酸處理時間34min，超聲時間7.5min，提取液配比(VCHCl3:VCH3OH)1.9:1。與原始工藝相比，濕菌油脂重量從42.67±1.43 mg/g提高到57.33±2.4mg/g，提高了36.5[％