骨形態(tài)形成蛋白13對C3H1T1-2細胞改善心梗大鼠心功能的影響.pdf

1、第一部分高滴度AdBMP13和AdGFP的獲得,C3H10T1/2細胞的轉染及體外生長分化情況
　　 目的:利用293細胞擴增以獲得高滴度的帶有GFP和BMP13基因的腺病毒,用AdBMP13感染C3H10T1/2細胞,并觀察目的細胞生長情況。
　　 方法:通過293細胞培養(yǎng)并利用293細胞擴增AdBMP13和AdGFP腺病毒,收集得到高滴度達到實驗要求的腺病毒。通過C3H10T1/2細胞傳代貼壁至60％～70%時,用腺

2、病毒感染C3H10T1/2細胞,6小時后換液,24小時后熒光倒置顯微鏡觀察綠色熒光表達并用流式細胞儀檢測感染效率。觀察轉染后細胞1周、2周、3周、4周生長情況,用免疫熒光試驗觀察心肌相關結構和功能蛋白a-MHC及cTNT的表達。結果:1.腺病毒經(jīng)293細胞反復擴增后,可以獲得高滴度的AdBMP13和AdGFP,滴度為5.0～6.0×1010/μL。
　　 2.高滴度的AdBMP13和AdGFP分別感染C3H10T1/2細胞24小

3、時后,流式細胞儀檢測熒光表達效率分別為89.42%、88.41%,均有較高的轉染率。
　　 3.倒置顯微鏡觀察轉染后細胞形態(tài),隨時間的推移細胞由多邊形、梭形逐漸向長條形轉變。
　　 4、免疫熒光結果顯示轉染后細胞有心肌相關結構和功能蛋白a-MHC及cTNT的表達,GFP組和BMP13組有明顯差異。
　　 結論:利用293細胞擴增可以得到高滴度的腺病毒;腺病毒對C3H10T1/2細胞有較高且穩(wěn)定的感染率;經(jīng)轉染后的

4、C3H10T1/2細胞生長情況良好并可以向心肌樣細胞分化。
　　
　　 第二部分 BMP13對C3H10T1/2細胞改善大鼠心功能作用的研究
　　 目的:探討在大鼠心肌梗死微環(huán)境中BMP13能否促進C3H10T1/2細胞向心肌樣細胞分化并且改善心梗大鼠的心功能。
　　 方法:56只SD(Sprague Dawley)雄性大鼠隨機分成四組:假手術組(Sham,n=8只),單純心梗組(myocardial

5、infarction,MI,n=16只),MI+pAdEasy-GFP重組腺病毒感染干細胞組(MI+GFP組,n=16只),MI+pAdEasy-BMPl3重組腺病毒感染干細胞組(MI+BMP13,n=16只)。各組體重檢測,1次/周;超聲心動圖檢測各組大鼠基線水平及術后4周心功能,比較各組指標變化及差異;Masson's染色比較各組心臟梗死面積差異;免疫熒光檢測被植入各組細胞心肌特異性結構蛋白a-MHC及cTnT的表達。