p27kip1半量敲除促進(jìn)血管新生與細(xì)胞保護(hù)改善心梗預(yù)后.pdf

1、p27kip1(p27)與p21cip1(p21)、p57kip2(p57)共同組成cip/kip家族參與對細(xì)胞周期調(diào)控。其中，對于p27的研究廣泛涉及生血管、免疫、腫瘤等各方面，并且早已成為研究細(xì)胞生存狀態(tài)下代謝與衰老、增殖與凋亡等各方面的重要途徑。然而，雖然p27作為細(xì)胞周期調(diào)控蛋白廣泛存在于真核生物細(xì)胞內(nèi)，且尤以心肌細(xì)胞等終末分化細(xì)胞表達(dá)為甚，但是其對心肌缺血后組織保護(hù)再生作用與機(jī)制研究甚少。心梗后NF-κB途徑的激活，成為早期炎

2、癥與生存途徑的關(guān)鍵調(diào)控因素。
　　本研究擬證明p27敲降對心梗預(yù)后存在直接與間接關(guān)聯(lián)。首先在心超檢測與生存率分析中，我們使用左前降支（LAD）結(jié)扎模擬小鼠心梗模型發(fā)現(xiàn)p27基因敲除小鼠(p27-/-)在心梗早期死亡率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于WT與單基因表達(dá)（p27+/-）組，而p27+/-組體現(xiàn)出強(qiáng)大的心功能預(yù)后能力。為研究其機(jī)制，我們通過在體與離體實(shí)驗(yàn)檢測并發(fā)現(xiàn)了p27+/-心功能的改善與梗死后新生血管的作用密切相關(guān)。我們通過免疫熒光血管染色(

3、IB4)與Masson染色及TUNEL凋亡試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)，p27+/-小鼠表現(xiàn)出強(qiáng)大的梗死后血管再生能力和與其相匹配的細(xì)胞抗凋亡能力與活力。離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，我們采用了p27慢病毒轉(zhuǎn)染敲降大鼠心肌H9c2細(xì)胞，研究中模擬心肌缺血缺氧環(huán)境后發(fā)現(xiàn)其抗凋亡與促血管新生功能機(jī)制與p27敲降后NF-κB途徑激活、下游肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial

4、 growth factor，VEGF)等促血管生成因子的分泌增加有著密切聯(lián)系。為了證明機(jī)制的相關(guān)性，我們進(jìn)一步采用了交互免疫共沉淀證明p27、IKK在心肌細(xì)胞中相互綁定。同時(shí)證實(shí)IKKi以及IKK阻滯劑ACHP可逆轉(zhuǎn)p27敲降心肌細(xì)胞HGF、VEGF分泌能力，更進(jìn)一步證明了內(nèi)源性p27下降所導(dǎo)致的血管新生與NF-κB途徑激活繼而分泌增加的HGF、VEGF存在直接關(guān)聯(lián)。而采取上清條件培養(yǎng)與抗體中和試驗(yàn)證明了p27敲降可使心肌HGF、VE