AKT、p27Kip1與Cyclin E在胃癌中表達(dá)及意義.pdf

1、目的:胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生與環(huán)境和遺傳因素有關(guān),是一個多因素、多階段的病理過程,其發(fā)生發(fā)展涉及到多個癌基因及抑癌基因的異常。在不同組織學(xué)類型及分化程度的胃癌中其基因的表達(dá)存在差異,研究分析癌基因及抑癌基因在胃癌中的表達(dá),對胃癌的預(yù)后評估具有重要價值。本研究旨在探討AKT、p27Kip1與Cyclin E表達(dá)在胃癌發(fā)生發(fā)展中的意義,為其預(yù)防、早期診斷及治療提供強(qiáng)有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用細(xì)胞生長曲線繪制、平皿

2、克隆形成實(shí)驗(yàn)與流式細(xì)胞儀技術(shù),觀察LY294002處理胃癌MGC803細(xì)胞后,細(xì)胞生長與周期變化。選用免疫細(xì)胞化學(xué)染色及Western-blotting,檢測MGC803細(xì)胞中AKT蛋白、p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白的表達(dá)。運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色,檢測組織芯片胃組織(包括對照組正常胃粘膜、癌旁、非典型增生、原發(fā)癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織)中AKT蛋白、p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白表達(dá)狀況,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3、
　　結(jié)果:1、用LY294002處理MGC803細(xì)胞后,繪制細(xì)胞生長曲線顯示,細(xì)胞生長速度明顯減慢(與未處理組對照比較);
　　2、平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, LY294002處理MGC803細(xì)胞后,細(xì)胞克隆體積變小,數(shù)量減少(與未處理組對照比較)。
　　3、流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,MGC803細(xì)胞經(jīng)LY294002處理后G1期細(xì)胞比例明顯增加,而S期細(xì)胞比例降低(與未處理組對照比較)。
　　4、免疫細(xì)胞化學(xué)染

4、色及 Western-blotting結(jié)果顯示,經(jīng) LY294002處理,MGC803細(xì)胞中AKT蛋白磷酸化降低,p27Kip1蛋白磷酸化升高,而Cyclin E蛋白表達(dá)也降低(與未處理組對照比較)。
　　5、免疫組織化學(xué)染色組織芯片檢測結(jié)果顯示,在原發(fā)癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌與正常胃粘膜、癌旁和非典型增生組織間磷酸化AKT蛋白表達(dá)陽性率間的差異,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　在正常胃粘膜和非典型增生間磷酸化 AKT蛋白表

5、達(dá)陽性率間的差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.26);磷酸化 p27Kip1蛋白表達(dá)的免疫組織化學(xué)染色顯示,在正常胃粘膜、非典型增生和癌旁與原發(fā)癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織間的磷酸化 p27Kip1蛋白表達(dá)的陽性率,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);免疫組織化學(xué)染色檢測Cyclin E蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,在正常胃粘膜、癌旁、非典型增生、原發(fā)癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中Cyclin E蛋白表達(dá)陽性率間的差異,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在正常胃粘膜與非典

6、型增生間的Cyclin E蛋白表達(dá)陽性率間的差異,亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.26)。
　　結(jié)論:
　　1、胃癌 MGC803細(xì)胞經(jīng) LY294002處理后,細(xì)胞生長增殖能力降低,呈現(xiàn)出G1/S期周期阻滯。
　　2、抑制AKT蛋白磷酸化,可導(dǎo)致MGC803細(xì)胞的p27Kip1蛋白磷酸化水平升高,而Cyclin E蛋白表達(dá)降低。
　　3、 AKT、p27Kip1蛋白磷酸化及Cyclin E蛋白表達(dá)水平與胃癌的發(fā)生、發(fā)