四個STR基因座熒光標記復(fù)合擴增的研究及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用.pdf

1、目的:本課題旨在建立已有群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)的STR基因座D11S4952、D7S3062、GATA168F06和D10S1426基因座的熒光標記復(fù)合擴增體系。按照美國DNA分析方法技術(shù)工作組(The Technology Working Group onDNA Analysis Methods，TWGDAM)的指導(dǎo)方案進行法醫(yī)學(xué)實用性研究。 方法:首先對多個本實驗室做過群體遺傳學(xué)研究的STR基因座進行篩選，從中獲得四個多態(tài)性好、個人

2、識別機率高，擴增產(chǎn)物長度片段有區(qū)別的四個STR基因座，即D11S4951、D7S3062、GATA168F06、D10S1426，利用傳統(tǒng)的復(fù)合擴增方法，ABI-310毛細管電泳儀進行熒光標記復(fù)合擴增的研究。并對復(fù)合擴增體系的靈敏度和準確度，不同擴增循環(huán)次數(shù)和熱啟動下復(fù)合擴增的效果等進行了研究。按照TWGDAM指導(dǎo)方案的基本要求，對該體系進行了法醫(yī)學(xué)實用性研究，包括基因座的種屬特異性，組織同一性及可重復(fù)性。 結(jié)果:成功建立了D1

3、1S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的熒光標記復(fù)合擴增體系。而且，這一擴增體系條件易于優(yōu)化，采用國產(chǎn)Taq酶，不需要熱啟動進行擴增，即可得到滿意的擴增產(chǎn)物和分型結(jié)果。相對于國外昂貴的試劑盒，是一種成本低廉但效率高的STR基因座復(fù)合擴增體系。法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究表明，該體系的檢測靈敏度為0.25ng模板DNA，四個STR基因座具有較高的種屬特異性，對同一個體的不同組織檢測結(jié)果一致，對常見基質(zhì)上的檢材及混合樣本具

4、有檢測能力。對15個實際檢案樣本的檢測證明，該體系能用于法醫(yī)學(xué)個人識別和親權(quán)鑒定。 結(jié)論:D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的熒光標記復(fù)合擴增體系可應(yīng)用ABI-310檢測平臺，獲得可靠的分型結(jié)果。法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究證明，該體系擴增條件易于優(yōu)化、成本低廉、分型結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度和準確度高，種屬特異性好，重復(fù)性好，對陳舊斑痕具有檢測能力，能夠?qū)ΤＲ娀|(zhì)上的斑痕以及混合斑痕正確分型，與常見的動物及微生