Ⅰ型單純皰疹病毒衣殼蛋白UL25與細(xì)胞骨架微管蛋白的相互作用及其生物化學(xué)分析.pdf

1、Ⅰ型單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus 1，HSV-1)是一種常見的病原體，人是其唯一自然宿主。病毒通過(guò)受損皮膚及粘膜感染宿主，在上皮組織增殖，且能進(jìn)一步從感染的上皮組織的神經(jīng)末稍入侵神經(jīng)元，并于初次感染后在三叉神經(jīng)節(jié)、背根神經(jīng)節(jié)等處建立伴隨終生的潛伏性感染。 HSV-1 UL25基因編碼一個(gè)重要的病毒衣殼蛋白，位于衣殼外表面五鄰體頂角附近。目前研究發(fā)現(xiàn)該蛋白參與了病毒感染過(guò)程中的許多重要生物學(xué)過(guò)程，包括病毒

2、在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)、增殖、裝配等。利用酵母雙雜交篩選技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)UL25與宿主細(xì)胞不同的結(jié)構(gòu)性和功能性蛋白存在相互作用，其中之一為與細(xì)胞骨架微管蛋白的相互作用。半乳糖苷酶活性分析實(shí)驗(yàn)顯示兩者的相互作用具有特異性。 將UL25重組到綠色熒光報(bào)告載體pEGFP-N2中，對(duì)構(gòu)建的UL25-EGFP融合蛋白進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)熒光分析，結(jié)果表明UL25分布于細(xì)胞質(zhì)中，與經(jīng)免疫熒光染色的細(xì)胞骨架微管蛋白共定位。進(jìn)一步利用秋水仙堿破壞細(xì)胞骨架微管結(jié)構(gòu)后

3、，發(fā)現(xiàn)UL25的分布與紊亂的微管蛋白亦基本重合，表明兩者在空間上具有明確的相互作用關(guān)系。由于HSV病毒在被感染細(xì)胞內(nèi)沿細(xì)胞骨架微管移動(dòng)，基于上述雙雜交實(shí)驗(yàn)和熒光分析，推測(cè)UL25可能在病毒衣殼細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)中具有重要的意義。 實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步對(duì)UL25基因不同片段的缺失突變體進(jìn)行熒光定位分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)U125 135-353aa和其羧基端360-580aa與UL25蛋白定位相似，而UL25氨基端140aa除在胞質(zhì)內(nèi)與微管蛋白共定位外，還同