鴨瘟病毒ul17蛋白與ul25蛋白、ul26.5蛋白的細(xì)胞共定位研究

1、論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)所使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名： ≯／中年易月I 砂日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位

2、論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留薺向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名：導(dǎo)師簽名砂f 咋年易月／2 日年 月 目A b s t r a c tC o —l o c a l i z a t i o no f U L l 7 P r o t e i na n d U L 2

3、 5 P r o t e i n ．U L 2 6 ．5P r o t e i nf r o mD u c k P l a g u e V i r u s i nI n f e c t e dC e l l sW e n T i n g ( P r e v e n t i v e V e t e r i n a r yM e d i c i n e )D i r e c t e db y P r o f ．C h e n g A n c

4、 h u n a n d P r o f ．W a n gM i n g s h uL i t t l e s t u d i e so n D P V U L l 7g e n eh a v e b e e nr e p o r t e d ．T h i s e s s a y f o c u s e d o nt h e s e q u e n c ec h a r a c t e r i s t i C S ．t r a n s

5、c r i p t i o na n de x p r e s s i o nd y n a m i c a n a l y s i s ．s u b c e l l u l a r 1 0 c a l i z a t i o n o f D P V U L l 7g e n ea n dU L l 7 p r o t e i n ．I na d d i t i o n , C o —l o c a l i z a t i o no f

6、U L l 7 p r o t e i na n dU L 2 5p r o t e i n , U L 2 6 ．5p r o t e i n b o r n d u c k p l a g u e v i r u sC H V s t r a i ni ni n f e c t e dc e l l s ．T h e r e s u l t s a r e a sf o l l o w s ：1 ．B i o i n f o r m

7、 a t i o na n a l y s i s o fD P V U L l 7g e n e ．T h eD P V U L l 7g e n e W a sa n a l y s e db yb i o i n f o r m a t i c s ．T h e r e s u l t s i n d i c a t e dt h a t U L l 7g e n e e n c o d e d p r o t e i n i S

8、 7 5 ．9 4 2 9 8 k D aa n dc o m p r i s i n g6 8 4 a m i n o a c i d s ．I th a d n os i g n a l p e p f i d ea n dt h e t r a n s m e m b r a n e r e g i o n ．A tt h es a m et i m e t h eU L l 7p r o t e i n c o n t a i

9、n e d 19p h o s p h o r y l a t i o n s i t e s ．4 g l y c o s y l a t i o n s i t e s a n dm u l t i p l ea n t i g e n i c e p i t o p e s ．I t W a s p r e d i c t e dl o c a t e di nn u c l e a r a n d c y t o p l a s

10、 m o f i n f e c t e d c e l l s ．2 ．P r o k a r y o t i c e x p r e s s i o n ，p u r i f i c a t i o n ，p o l y c l o n a la n t i b o d y p r e p a r a t i o no f D P V U L l 7 g e n e ．B a s e d o nt h eU L l 7 g e n

11、es e q u e n c e ．a(chǎn) p a i ro fs p e c i f i cp r i m e r sW a s d e s i g n e db y P r i m e r P r e m i e r 5 ．0 ．T h e a m p l i f i e d D P V U L l 7 g e n e W a S c l o n e d i n t o t h e p M D 2 0 一T v e c t o r p

12、M D 2 0 ．U L l 7 a n dp r o k a r y o t i c e x p r e s s i o n v e c t o r p E T - 3 2 a ( + 1 w e r ed i g e s t e dw i t h X h o J 『和B 臼m H 上T h e n t h e U L l 7 g e n eW a si n s e r t e d i n t o t h e - 偽D I 和B a

13、m H Is i t e o fp E T - 3 2 a ( + ) ．T o e x p r e s st h e U L l 7p r o t e i n , t h er e c o m b i n a n t p l a s m i d p E T 3 2 a - U L l 7 W a S t r a n s f o r m e di n t oB L 2 1 ( D E 3 ) ．S D S ．P A G Er e s u

14、 l ts h o w e dm a t t h ee x p r e s s e dp r o t e i ni S a b o u t9 6k D 亂n er e c o m b i n a n tp r o t e i nW a Sp u r i f i e d w i t h N i 小汀Am e t h o d , t oi m m u n i z e B A L B ／Cm i c ea n dr a b b i t sf

15、o rp o l y c l o n a la n t i b o d yp r e p a r a t i o n ．T h e1 1 i 曲e s ta n t i b o d i e sf i t e r sw e r e1 ：4a n d 1 ：3 2 ．3 ．T r a n s c r i p t i o na n d e x p r e s s i o nd y n a m i c a n a l ) ，s i so fD

16、P V U L l 7 g e n e ．B a s e d o n t h eU L l 7g e n es e q u e n c e ．a(chǎn)p a i ro fp d r n e r sf o rF Q - P C RW a sd e s i g n e d ．T h er e s u l to f d m gi n h i b i t i o n s t u d ys h o w s t h a tD P V U L l 7 g

17、e n e i Sa l a t eg e n e ．T h e r e a l - t i m ef l u o r e s c e n tq u a n f i t a f i o nP C R r e s u l t ss h o w st h a tt h e U L l 7 9 e n e t r a n s c i p t i sf i r s t l yd e t e c t e da t 12 h o u r p o s

18、 ti n f e c t i o n e m , a n d r e a c h e s t h e h i g h e s t a t4 8h o u rp o s ti n f e c t i o n e m ，t h e n f a l l ss h a r p l y a t7 2h o u rp o s ti n f e c f i o n e m ．T h r o u g hW e s t e m B l o t t i

19、n gt h eU L l 7 p r o t e i ni Sf i r s t l yd e t e c t e da t3 6 h o u rp o s ti n f e c t i o n e mi n i n f e c t e d c e H s ．A b o v e a 1 1 ．D P VU L l 7 g e n ei sa l a t eg e n e ．4 ．S u b c e l l u l a rl o c a

20、 f i o no f D P V U L l 7 p r o t e i n ．T h es u b c e l l u l a r l o c a t i o no f D P V U L l 7 p r o t e i ni n i n f e c t e d c e l l s W a sd e t e c t e db yi n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e ．

21、T h er e s u l t s i n d i c a t e t h a t U L l 7p r o t e i n l o c a t e s i nt h e c y t o p l a s m f i r s t l y , t h e n1 0 c a t e s i n n u c l e u r a n dc y t o p l a s m ．5 ．C o - l o c a l i z a t i o n o f

22、D P V U L l 7p r o t e i n a n dU L 2 5p r o t e i n ．U L l 7p r o t e i na n dU L 2 6 ．5p r o t e i ni n i n f e c t e dc e l l s ．T h eC O ．1 0 c a l i z a t i o n o fD P V U L l 7p r o t e i na n dU L 2 5 p r o t e i

23、n , U L l 7p r o t e i na n dU L 2 6 ．5p r o t e i ni ni n f e c t e d c e l l sw e r es t u d i e db yd o u b l ei n d i r e c ti m m u n o f l u o r e s c e n c e ．T h e r e s u l t ss h o wt h a tU L l 7 p r o t e i n