肺泡上皮細胞對巨噬細胞抗Mtb感染中TLR信號介導炎癥反應的影響.pdf

1、肺結(jié)核是結(jié)核分枝桿菌引起的人畜共患傳染病，肺臟巨噬細胞是結(jié)核分枝桿菌感染機體后的主要寄居場所，在抗結(jié)核分枝桿菌感染免疫中發(fā)揮重要作用。近年來研究表明肺臟上皮細胞在抵抗外源微生物入侵中也發(fā)揮著重要保護，而機體抵抗外源病菌依賴于多種細胞之間的相互作用。因此模擬體內(nèi)肺泡類似的氣液相生長的細胞模型探究上皮細胞對巨噬細胞抗結(jié)核分枝桿菌感染免疫反應的調(diào)控機制，將有助于進一步闡明結(jié)核分枝桿菌感染的分子機制。
　　本研究采用人肺泡上皮細胞A549

2、與單核巨噬細胞U937氣液相共培養(yǎng)系統(tǒng)，通過檢測結(jié)核分枝桿菌H37Rv分別感染或共感染兩種細胞后巨噬細胞Toll-樣受體(TLR)信號及其下游炎癥因子的變化，試圖揭示肺泡上皮細胞對巨噬細胞抗結(jié)核分枝桿菌感染的免疫調(diào)節(jié)作用及其相關機制。得到的相關結(jié)果如下：
　　(1)在共培養(yǎng)模型中，H37Rv感染U937后可以激活U937細胞中TLR信號通路(TLR2/4/6/8、MyD88、TRAF6、NF-kB)的表達進而刺激炎癥因子IL-1β

3、/2/6/8/10/12β的表達，誘發(fā)強烈的炎癥反應;當U937及A549共感染結(jié)核分枝桿菌后U937 TLR信號介導的炎癥反應反而低于共培養(yǎng)單獨感染U937組，A549上皮細胞可能在調(diào)控巨噬細胞的免疫反應中起到了特殊的作用，使得A549在一定程度上減輕共培養(yǎng)U937細胞中TLR信號介導的炎癥反應。
　　(2) PI3K抑制劑LY294002干預后可以在整體上降低共培養(yǎng)模型中U937抗H37Rv感染TLR信號介導的炎癥反應強度。但

4、是在有LY294002的情況下，共培養(yǎng)共感染組的U937細胞較共培養(yǎng)單獨感染U937組TLR信號介導的炎癥反應更強烈。機理上，共培養(yǎng)共感染組的U937細胞內(nèi)GSK3β表達顯著高于共培養(yǎng)單獨感染U937，表明LY294002可以通過降低pGSK3β的表達提高GSK3β的活性，抑制A549細胞對巨噬細胞炎癥反應的調(diào)控作用。說明LY294002的存在能夠阻斷A549減輕共培養(yǎng)U937細胞中TLR信號介導的炎癥反應的作用。
　　(3)當利

5、用LiCl抑制PI3K下游蛋白GSK3β后，LiCl干預下U937細胞中TLR信號介導的炎癥因子的下調(diào)與GSK3β活性形式蛋白的下調(diào)同時存在。以上結(jié)果顯示，在共培養(yǎng)模型中GSK3β在A549上皮細胞與U937單核巨噬細胞抗Mtb感染的炎癥反應中起到了重要的平衡作用。
　　(4)當雷帕霉素抑制PI3K下游蛋白mTOR后，會顯著上調(diào)共培養(yǎng)感染模型中U937細胞TLR4、TLR6、IL-6、IL-12β的表達。實驗結(jié)果顯示抑制mTOR后