白介素-6、白藜蘆醇對(duì)肺泡上皮細(xì)胞A549增殖的影響.pdf

1、目的：研究白介素-6(interleukin-6，IL-6)、白藜蘆醇(resveratrol，Res)對(duì)肺泡上皮細(xì)胞A549增殖的影響，觀察其對(duì)內(nèi)毒素(endotoxin，LPS)誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷中的干預(yù)作用。探討白藜蘆醇誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的機(jī)制，并構(gòu)建A549細(xì)胞白介素-6 RNA干擾模型。 方法：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)A549細(xì)胞培養(yǎng)，按預(yù)設(shè)方案添加白介素．6、白藜蘆醇、內(nèi)毒素處理細(xì)胞樣品；采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法(

2、MTT法)檢測(cè)A549細(xì)胞的增殖效應(yīng)及不同藥物對(duì)其增殖效應(yīng)的影響；運(yùn)用TUNEL染色檢測(cè)白藜蘆醇誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡；運(yùn)用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blotting)檢測(cè)A549細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化；化學(xué)合成法合成白介素-6 SiRNA，通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染干擾A549細(xì)胞白介素-6的表達(dá)；運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)A549細(xì)胞內(nèi)IL-6的表達(dá)及LPS刺激后的變化。 結(jié)果： 1．內(nèi)毒素能損傷體外

3、培養(yǎng)的A549細(xì)胞，其作用具有明顯的時(shí)間、濃度依賴性；外源性白介素-6對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷的干預(yù)作用不明顯。 2．白藜蘆醇對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷的干預(yù)作用不明顯。白藜蘆醇對(duì)A549細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，這種作用具有明顯的時(shí)間、濃度依賴性。白藜蘆醇對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制作用部分是通過(guò)誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)的。白藜蘆醇誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡可能是通過(guò)抑制Akt的表達(dá)及其磷酸化，從而調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑相關(guān)

4、蛋白的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的，其對(duì)死亡受體途徑的相關(guān)蛋白影響不明顯。 3．體外培養(yǎng)的A549細(xì)胞存在白介素-6基因的表達(dá)，內(nèi)毒素刺激A549細(xì)胞能導(dǎo)致其表達(dá)量的變化，通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的白介素-6 SiRNA能干擾A549細(xì)胞中白介素-6的表達(dá)。 結(jié)論： 外源性的白介素-6和白藜蘆醇對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷的干預(yù)作用不明顯；白藜蘆醇對(duì)A549細(xì)胞存在明顯的增殖抑制作用，能夠通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡；