miRNA-21改善3T3-L1脂肪細(xì)胞模型的胰島素抵抗及機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過(guò)高糖高胰島素培養(yǎng)誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞株構(gòu)建胰島素抵抗(insulin resistance，IR)模型，觀察IR脂肪細(xì)胞miR-21表達(dá)量的變化及脂肪細(xì)胞miR-21表達(dá)增加對(duì)IR的改善作用，并初步探討其改善脂肪細(xì)胞胰島素敏感性的部分機(jī)制。
　　方法:
　　(1)通過(guò)傳統(tǒng)的雞尾酒方法誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成熟脂肪細(xì)胞;
　　(2)將成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞分為正常糖低INS(NGLI)組、正常糖高

2、INS(NGHI)組、高糖低INS(HGLI)組、高糖高INS(HGHI)組，應(yīng)用氚標(biāo)記的2-脫氧葡萄糖(2-3H-DG，2-DG)攝取試驗(yàn)檢測(cè)脂肪細(xì)胞INS敏感性，通過(guò)高糖高胰島素處理建立3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞IR模型;
　　(3)將IR脂肪細(xì)胞分為3組:IR組、轉(zhuǎn)染含pmiR-21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(pmiR-21)、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(pNC)，并設(shè)立對(duì)照組（正常脂肪細(xì)胞），實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組脂肪細(xì)胞miR-21表

3、達(dá)水平差異;
　　(4)應(yīng)用2-DG攝取試驗(yàn)檢測(cè)以上各組脂肪細(xì)胞的INS敏感性;
　　(5)Western blot技術(shù)檢測(cè)各組脂肪細(xì)胞PTEN蛋白、Akt蛋白以及p-Aktser473蛋白水平的差異。
　　結(jié)果:
　　(1)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化成熟，誘導(dǎo)第10天油紅O染色可見呈圓形或橢圓形，細(xì)胞漿內(nèi)大量紅色脂滴聚集的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞;
　　(2) NGHI組與NGLI組相比3T3-L1

4、細(xì)胞INS刺激葡萄糖攝取無(wú)顯著差異(P＞0.05)。HGLI組的3T3-L1細(xì)胞INS刺激葡萄糖攝取與NGLI組相比減少(P＜0.05)。HGHI組與NGHI組相較葡萄糖攝取減少(P＜0.05)。HGHI組與NGLI組3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取率相比明顯減少(P＜0.01);
　　(3) IR組miR-21表達(dá)較對(duì)照組下降(P＜0.05)，pmiR-21組miR-21的表達(dá)與對(duì)照組相比，表達(dá)量無(wú)顯著差異（P＞0.05），pmi

5、R-21組與IR組比較，miR-21表達(dá)量增加(P＜0.05)。pNC組與對(duì)照組相比表達(dá)下降(P＜0.05)，與IR組比較表達(dá)量無(wú)顯著差異（P＞0.05）;
　　(4) IR組與對(duì)照組比較，INS刺激葡萄糖攝取率減少(P＜0.05)。pmiR-21組與對(duì)照組相比，INS刺激葡萄糖攝取率無(wú)顯著差異(P＞0.05)，與IR組比較攝取增加（P＜0.05）。pNC組脂肪細(xì)胞與對(duì)照組比較INS刺激葡萄糖攝取率減少(P＜0.05)，與IR組相

6、比無(wú)顯著差異（P＞0.05），與pmiR-21組相比較減少（P＜0.05）;
　　(5) IR組3T3-L1脂肪細(xì)胞與對(duì)照組相比PTEN蛋白的表達(dá)量增加(P＜0.05)，p-Aktser473表達(dá)減少（P＜0.05）。pmiR-21組與對(duì)照組相比，PTEN及p-Aktser473表達(dá)均無(wú)顯著差異（P＞0.05），與IR組比較PTEN表達(dá)減少（P＜0.05），p-Aktser473表達(dá)增加（P＜0.05）。pNC組與對(duì)照組相比PTE

7、N表達(dá)增加(P＜0.05)，p-AktSer473表達(dá)減少(P＜0.05)，與IR組比較PTEN及p-Aktser473表達(dá)無(wú)顯著差異(P＞0.05)。各組脂肪細(xì)胞的Akt表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　(1)高糖高INS誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞產(chǎn)生IR，miR-21表達(dá)減少，PTEN蛋白表達(dá)增加，p-Aktser473表達(dá)減少，Akt表達(dá)無(wú)明顯改變;
　　(2)轉(zhuǎn)染pmiR-21使miR-21在IR